小鼠血细胞，WEHI-3细胞 * 一、原理
细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。
单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。
测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。
BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。 二、仪器、用品与试剂 小鼠血细胞，WEHI-3细胞 *
1、仪器、用品：同常规细胞培养
2、试剂：BrdU（1.0mg/ml），甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2×SSC液 三、操作步骤
1、细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU，使zui终浓度为10μg/ml。
2、44小时加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。
3、48小时后常规消化细胞至离心管中，注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。
4、常规染色体制片（见第三部分：染色体技术）。
5、染色体玻片置56℃水浴锅盖上，铺上2×SSC 液，距紫外灯管6cm处紫外照射30分钟。
6、弃去2×SSC液，流水冲洗。
7、Giemsa液染色10分钟，流水冲洗，晾干。
8、镜检100个分裂相，计*、二、三、四细胞期分裂指数。
9、计算：细胞周期（Tc）=48/（小时）
附：（1）BrdU配制: BrdU 10mg十双蒸水10ml 4℃下避光保存。
（2）2×SSC配制： NaCl 1.75克，柠檬酸三钠-2H2O0.88克，加水至100ml，4℃保存。 细胞的冻存和复苏 小鼠血细胞，WEHI-3细胞 *
一、原理
在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞zui易受损的-5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。
目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。 ： 或:tongpaibio索取细胞资料 客服 细胞株查询： 小鼠乳腺癌细胞，MA782细胞
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