人细小病毒B19核酸扩增检测试剂盒
 
适用于检测人血清、羊水等样本中人细小病毒B19 (HPV-B19 )DNA，用于人细小病毒B19 (HPV-B19)感染的辅助诊断及其感染病人药物治疗的疗效监控。其检测结果仅供临床参考。
【使用方法】
1．DNA提取
血清或羊水:充分混匀上述标本，取100μl羊水或血清转移至1.5ml离心管中，加入100μl核酸提取液A， 13,000rpm离心5分钟，弃上清(勿碰及下面沉淀)，沉淀加50μl核酸提取液B(DNA) 充分混匀（提取液用前需室温溶解并充分混匀）后100℃10分钟，后13,000rpm离心3分钟，取上清液3μl做PCR反应。
阴性质控品：取50μl阴性质控品，加50μl核酸提取液B充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液3μl做PCR反应。
HPV-B19阳性质控品：直接取3μl进行PCR扩增，或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。
2．PCR扩增
根据标本量取HPV-B19-PCR反应管，加入处理后样品3μl，1,0000rpm瞬时离心30秒。将各反应管放入PCR仪器的反应槽内，按对应顺序标记阴性质控品，HPV-B19-阳性质控品及未知标本，循环条件如下:
94℃→2分钟，后93℃ 30秒→58℃30秒→72℃ 30秒，共35个循环。
人细小病毒B19核酸扩增检测试剂盒 3．电泳检测
3.1 2%琼脂糖凝胶配制：稀释50×TAE（或5×TBE）至1×TAE(取20ml50×TAE，加980 ml双蒸水至1L)，称4g琼脂糖放于500mL 锥形瓶中，1×TAE 200 ml,置入微波炉中加热熔解(避免加热沸腾溶液外溢)，再加入20μl 溴化乙锭(EB)充分混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后使用。
3.2 电泳检测：直接取PCR 扩增产物15μl，用加样枪点样于琼脂糖凝胶孔中，以5V/cm 电压，1×TAE中电泳，紫外灯下观察结果。
4. 结果判断
阴性质控品无带出现(引物带除外)，HPV-B19-阳性质控品出现302bp 扩增带，若被检样品出现302bp 扩增带为人细小病毒B19阳性，否则为阴性。

人细小病毒B19核酸扩增检测试剂盒  【标本采集、保存和运输】
1. 适用标本类型：血清、羊水等。
2. 标本采集：
血清：用无菌注射器抽取受检者静脉血1毫升，注入无菌2ml干燥管(或含促凝成分)，室温静置1小时，3000g离心3分钟，可取上清立即用于测试；或吸取上部血清(约200μl)转入无菌1.5ml Eppendoff管，保存待检。
羊水：用无菌注射器取羊水3-5ml，转至5ml洁净离心管中，密封送检。
3. 保存和运输：标本可立即用于测试， 2-8℃保存下不应超过24小时； -70℃以下长期保存。避免反复冻融。标本运送时应采用0℃冰壶。
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