人肺癌细胞 A-427细胞 猪瘟病毒核酸扩增检测试剂盒

使用方法:
1.DNA提取
1.1样品处理    
血清或病毒液：取液体标本约50μl，转至1.5ml洁净离心管中，加50μl核酸提取液B充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液3μl进行PCR扩增。
肺、脾、肾、肠系膜及额下淋巴结等固体组织：取约200mg固体组织，用生理盐水洗净表面残余血液，转至研磨器中，加1ml生理盐水，研磨成组织匀浆，取50μl组织匀浆液转至1.5ml洁净的离心管中，加50μl核酸提取液B（内含不溶物质，用前需室温溶解并充分混匀），充分混匀，100℃裂解10min，4℃13,000g离心3min，取上清液3μl进行PCR扩增。
阴性质控品：取50μl阴性质控品，加50μl核酸提取液B充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液3μl进行PCR扩增。
ASFV阳性质控品：直接取4μl进行PCR扩增。或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。
2．PCR扩增
从试剂盒中取出ASFV–PCR MIX、Taq酶系，室温融化并振荡混匀后，10,000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N（N=样本数+1管阴性对照+4管阳性对照），每个测试反应体系配制如下表：
人肺癌细胞 A-427细胞 试剂    ASFV–PCR MIX    Taq酶系
用量    24μl    2μl

猪瘟病毒(ASFV)核酸扩增检测试剂盒 适用于检测猪血清、肺、脾、肾、肠系膜及额下淋巴结等组织标本或病毒培养液中非洲猪瘟病毒(ASFV)DNA，适用于猪瘟病毒感染的辅助诊断及流行病学调查。其检测结果仅供参考。
试剂盒用一对非洲猪瘟病毒(ASFV)特异性引物和一条特异性荧光探针，应用碱裂解法裂解提取DNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR-荧光探针法对非洲猪瘟病毒(ASFV)DNA进行扩增，从而达到实时快速定量检测之目的。

人肺癌细胞 A-427细胞 适用标本类型：猪血清、肺、脾、肾、肠系膜及额下淋巴结等组织标本或病毒培养液等。

标本采集:
猪肺、脾、肾、肠系膜及额下淋巴结等组织：采集可疑病死猪或捕杀病猪疑似组织约1g左右，置入1.5ml洁净EP管，立即送检。

血清:用一次性无菌注射器抽取受检猪耳静脉或者前腔静脉静脉血2-5ml，静置斜放待血清析出， 1,0000rpm离心3分钟，可取上清立即用于测试；或吸取上部血清(约500μl)转入无菌1.5ml Eppendoff管，立即送检。

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10,000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入26μl，向每管中加入处理后样品(所获得的逆转录产物)或阴性质控品、ASFV阳性定量标准品(使用前用阴性质控品梯度稀释10倍、100倍、1000倍，记为1×10P6PCopies/ml，1×10P5PCopies/ml，1×10P4PCopies/ml)和阴性质控品4μl，10,000rpm瞬时离心30秒。将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内，按对应顺序设置阴性控品，阳性质控品以及未知标本，并设置反应体积(30μl)、样品名称、标记荧光基团种类(报告基团为FAM，淬灭基团为TAMRA)和循环条件：
ABI PRISM 7700，ABI PRISM5700，ABI GeneAmp 7000 (需要剪掉反应盖)，ABI PRISM7300/7500(使用8联管)，MJ Opticon(使用8联管)等使用薄壁管的仪器，循环条件：94℃→2分钟，后93℃ 30秒→55℃ 45秒，共40个循环。
LightCycler等使用毛细管的仪器，循环条件：94℃→2分钟，后93℃ 5秒→56℃ 45秒，共40个循环。

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*细胞株查询：
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