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传代细胞 人结直肠癌细胞,DiFi细胞
点击次数:1004 更新时间:2015-07-01

公司实验室长期提供各内人类肿瘤细胞,正常细胞,耐药株,ATCC细胞,传代细胞癌细胞株。动物肿瘤细胞,正常细胞,耐药株,癌细胞株。具体细胞培养条件,代数以及来源问题请与在线客服咨询:

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ELISA

一、包被抗原

1.用50mM的碳酸盐包被缓冲液(pH9.6)溶解抗原,使抗原浓度为10-20μg/ml,加100ul/孔到96孔酶标板,4oC放置过夜。

2.第二天弃去包被液后,用PBST洗涤3次,每孔加入150ul 1%BSA37oC封闭1小时。

3.PBST洗涤3次后,每孔加入100ul不同倍比稀释度的血清,并加入对照样品,37oC孵育2小时。

4.PBST洗涤5次后,加入100ul稀释后的 HRP标记的二抗,37oC孵育1小时。

5. PBST洗涤5次后,显色剂显色20min后,酶标仪上读取A405吸收值。

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二、包被细胞

1.在96孔培养板上接种细胞数为1X104 cells/well,37℃过夜培养。
2.第二天用 PBS洗涤培养板2-3次。

3.加入125ul/well 10% Forma lin(1:10稀释),室温下固定15min。

4.用ddH2O洗涤培养板3次,并晾干,储藏在2-8oC备用。
5.用PBST洗涤3次,每孔加入150ul1%BSA 37oC封闭 1小时。

6. PBST洗涤3次后,每孔加入100ul不同倍比稀释度的血清,并加入对照样品,37oC孵育2小时。

7. PBST洗涤5次后,加入100ul稀释后的 HRP标记的二抗,37oC孵育 1小时。

8. PBST洗涤 5次后,显色剂显色20min后,酶标仪上读取 A405吸收值。50mM的碳酸盐包被缓冲液:0.05mol/LpH9.6碳酸缓冲液,4℃保存,Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸馏水稀释至 100 ml。ABTS作为底物进行显色反应(10ml):0.2M Na2HPO4  2.4ml  0.1M柠檬酸 2.6ml ddH2O  ABTS 5ml 5mgH2O2(30%)4 ul(用前加入)

注意:
一般做倍比稀释进行检测,需要有相应的对照血清。不同的显色系统对应不同的光吸收值。


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