传代细胞人结直肠癌细胞，DiFi细胞

更新时间：2015-07-01

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人胚胎气管组织来源细胞，CCC-HBE-2细胞
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ELISA

一、包被抗原

1.用50mM的碳酸盐包被缓冲液（pH9.6）溶解抗原，使抗原浓度为10-20μg/ml，加100ul/孔到96孔酶标板，4oC放置过夜。

2.第二天弃去包被液后，用PBST洗涤3次，每孔加入150ul 1％BSA37oC封闭1小时。

3.PBST洗涤3次后，每孔加入100ul不同倍比稀释度的血清，并加入对照样品，37oC孵育2小时。

4.PBST洗涤5次后，加入100ul稀释后的 HRP标记的二抗，37oC孵育1小时。

5. PBST洗涤5次后，显色剂显色20min后，酶标仪上读取A405吸收值。

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二、包被细胞

1.在96孔培养板上接种细胞数为1X104 cells/well，37℃过夜培养。
2.第二天用 PBS洗涤培养板2-3次。

3.加入125ul/well 10% Forma lin（1:10稀释）,室温下固定15min。

4.用ddH2O洗涤培养板3次，并晾干，储藏在2-8oC备用。
5.用PBST洗涤3次，每孔加入150ul1％BSA 37oC封闭 1小时。

6. PBST洗涤3次后，每孔加入100ul不同倍比稀释度的血清，并加入对照样品，37oC孵育2小时。

7. PBST洗涤5次后，加入100ul稀释后的 HRP标记的二抗,37oC孵育 1小时。

8. PBST洗涤 5次后，显色剂显色20min后，酶标仪上读取 A405吸收值。50mM的碳酸盐包被缓冲液：0.05mol/LpH9.6碳酸缓冲液,4℃保存,Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸馏水稀释至 100 ml。ABTS作为底物进行显色反应(10ml)：0.2M Na2HPO4 2.4ml 0.1M柠檬酸 2.6ml ddH2O ABTS 5ml 5mgH2O2(30%)4 ul（用前加入）

注意：
一般做倍比稀释进行检测，需要有相应的对照血清。不同的显色系统对应不同的光吸收值。

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