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ELISA 一、包被抗原 1.用50mM的碳酸盐包被缓冲液(pH9.6)溶解抗原,使抗原浓度为10-20μg/ml,加100ul/孔到96孔酶标板,4oC放置过夜。 2.第二天弃去包被液后,用PBST洗涤3次,每孔加入150ul 1%BSA37oC封闭1小时。 3.PBST洗涤3次后,每孔加入100ul不同倍比稀释度的血清,并加入对照样品,37oC孵育2小时。 4.PBST洗涤5次后,加入100ul稀释后的 HRP标记的二抗,37oC孵育1小时。 5. PBST洗涤5次后,显色剂显色20min后,酶标仪上读取A405吸收值。 人胃腺癌细胞,SGC-7901细胞 人胰腺导管癌细胞,CFPAC-1细胞 人食管癌细胞,EC109细胞 人食管癌细胞,NEC细胞 人结肠腺癌细胞,LS 180细胞 人结直肠腺癌瘤株,HCT 116细胞 人结直肠腺癌细胞,COLO 201细胞 人结直肠癌细胞,DiFi细胞 人肝癌细胞,Hep-3B细胞 人肝腹水腺癌细胞,SK-HEP-1细胞 人肝癌细胞,HHCC细胞 人肝癌细胞,HB611细胞 人胃腺癌细胞,AGS细胞 人非小细胞肺癌细胞,NCI-H838细胞 人肺鳞癌细胞 LTEP-s细胞 人小细胞肺癌细胞 LTEP-sm细胞 人肺鳞癌瘤株 LTEP-s细胞 人肺鳞癌细胞 NCI-H1703细胞 人肺鳞癌细胞 NCI-H2170细胞 人非小细胞肺癌细胞 NCI-H524细胞 人肺腺癌细胞 SPC-A1细胞 人肺癌细胞 A549细胞 人非小细胞肺癌细胞 H125细胞 人肺癌细胞 H1299细胞 二、包被细胞 1.在96孔培养板上接种细胞数为1X104 cells/well,37℃过夜培养。 2.第二天用 PBS洗涤培养板2-3次。 3.加入125ul/well 10% Forma lin(1:10稀释),室温下固定15min。 4.用ddH2O洗涤培养板3次,并晾干,储藏在2-8oC备用。 5.用PBST洗涤3次,每孔加入150ul1%BSA 37oC封闭 1小时。 6. PBST洗涤3次后,每孔加入100ul不同倍比稀释度的血清,并加入对照样品,37oC孵育2小时。 7. PBST洗涤5次后,加入100ul稀释后的 HRP标记的二抗,37oC孵育 1小时。 8. PBST洗涤 5次后,显色剂显色20min后,酶标仪上读取 A405吸收值。50mM的碳酸盐包被缓冲液:0.05mol/LpH9.6碳酸缓冲液,4℃保存,Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸馏水稀释至 100 ml。ABTS作为底物进行显色反应(10ml):0.2M Na2HPO4 2.4ml 0.1M柠檬酸 2.6ml ddH2O ABTS 5ml 5mgH2O2(30%)4 ul(用前加入) 注意: 一般做倍比稀释进行检测,需要有相应的对照血清。不同的显色系统对应不同的光吸收值。 人小细胞肺癌细胞,DMS 153细胞 人高转移肺癌细胞,95-D细胞 人低分化肺腺癌细胞,GLC-82细胞 人肺细胞,HLF-a细胞 人胚肺二倍体细胞,HEL-1细胞 人胚肺二倍体细胞,HEL-2细胞 人肺癌细胞,H1299细胞 人胚肺二倍体细胞,KMB-17细胞 人胚肺细胞系,KuMA细胞 人肺鳞癌细胞,LTEP-s细胞 人小细胞肺癌细胞,LTEP-sm细胞 人肺鳞癌瘤株,LTEP-s细胞 人胚胎心肌组织来源,CCC-HEH-2细胞 人脐静脉内皮细胞,HUV-EC-C细胞 人脐静脉内皮细胞(人膀胱癌细胞污染),ECV-304细胞 人胚胎心脏成纤维样细胞,HEH2细胞 人肝癌细胞,BEL-7402细胞 人胚胎肠粘膜组织来源细胞,CCC-HIE-2细胞 人正常肝细胞,L-02细胞 人胰腺癌细胞,PANC-1细胞 人肝癌细胞,Hep G2细胞 人结直肠癌细胞,T84细胞 人胃腺癌细胞,BGC-823细胞 人肝癌细胞,HuH-7细胞 人结直肠腺癌细胞,HCT-8细胞 人结直肠腺癌细胞,HT-29细胞 人结直肠腺癌细胞,COLO 205细胞 人十二脂肠腺癌,HuTu-80细胞 人结直肠腺癌细胞,HCT 116细胞 人结直肠腺癌细胞,LoVo细胞 人胰腺腺泡上皮癌,HPAC细胞 人结直肠腺癌细胞,SW620细胞 人胰腺癌细胞,AsPC-1细胞 人胃癌细胞,MKN-45细胞
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