菌种传代培养保藏法

更新时间：2015-07-10

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定期移植法亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，zui适条件下培养，待生长充分后，于4～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。

操作步骤如下:培养基制备
器皿准备,培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。

菌种传代培养保藏法 溶解培养基配料先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，zui后加足水量，搅拌均匀。

调pH值配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。

菌种传代培养保藏法 加凝固剂配制固体培养基时需加凝固剂，如琼脂、明胶等。将凝固剂加入液体培养基中，加热并不断搅拌至融解，再补足所蒸发水分。

过滤分装在二层纱布中间夹入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分装。斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。分装过程中勿使培养基沾污管口，以免弄湿棉塞造成污染。

瑞士假单胞菌   Pseudomonas reinekei
恶臭假单胞菌
嗜冷假单胞菌   Pseudomonas psychrophila
类产碱假单胞菌   Pseudomonas pseudoalcaligenes
草假单胞菌
穿孔素假单胞菌   Pseudomonas pertucinogena
烂泥假单胞菌   Pseudomonas peli
孔雀尾假单胞菌   Pseudomonas pavonaceae
帕勒隆尼氏假单胞菌   Pseudomonas palleroniana
海绵假单胞菌   Pseudomonas pachastrellae
耳炎假单胞菌   Pseudomonas otitidis

包扎标记:将试管加棉塞，外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。
灭菌根据要求将培养基灭菌，通常蒸汽灭菌为121℃，15～20min。
斜面摆放,灭菌后及时摆放斜面，斜面长度不超过试管管长的二分之一为宜。
无菌检查将灭菌的培养基放入培养箱中作无菌检验，通常30℃培养1～3天。无菌检查合格后将其保存于4℃下备用。

接种:斜面接种,点接把菌种点接在斜面中部偏下方处。适用于扩散型生长及绒毛状气生菌丝类霉菌（如毛霉、根霉等）。

中央划线:从斜面中央自下而上划一直线。适用于细菌和酵母菌等。
稀波状蜿蜒划线法从斜面底部自下而上划“之"字形线。适用于易扩散的细菌，也适用于部分真菌。
密波状蜿蜒划线法从斜面底部自下而上划密“之"字形线。能充分利用斜面获得大量菌体细胞，适用于细菌和酵母菌等。
挖块接种法挖取菌丝体连同少量培养基，转接到新鲜斜面上。适用灵芝等担子菌类真菌。

穿刺接种用接种针从原菌种斜面上挑取少量菌体，从柱状培养基中心自上而下刺入，直到接近管底（勿穿到管底），然后沿原穿刺途径慢慢抽出接种针。适用于细菌和酵母菌等。

液体接种:挑取少量固体斜面菌种或用无菌滴管等吸取原菌液接种于新鲜液体培养基中。

嗜一氧化碳假诺卡氏菌   Pseudonocardia carboxydivorans
食苯假诺卡氏菌   Pseudonocardia benzenivorans
自养假诺卡氏菌
橙色假诺卡氏菌   Pseudonocardia aurantiaca
不解糖假诺卡氏菌   Pseudonocardia asaccharolytica
氨氧化假诺卡氏菌   Pseudonocardia ammonioxydans
桤木假诺卡氏菌   Pseudonocardia alni
嗜丙氨酸假诺卡氏菌   Pseudonocardia alaniniphila
厦门假单胞菌   Pseudomonas xiamenensis
黄色海假单胞菌
浅绿黄假单胞菌   Pseudomonas viridiflava
斡氏假单胞菌   Pseudomonas veronii
温哥华假单胞菌   Pseudomonas vancouverensis
阴城假单胞菌   Pseudomonas umsongensis
托木尔峰假单胞菌
平凡假单胞菌   Pseudomonas trivialis
山黄麻假单胞菌   Pseudomonas tremae
托拉斯假单胞菌   Pseudomonas tolaasii
赛维瓦尔假单胞菌   Pseudomonas thivervalensis
腐臭假单胞菌   Pseudomonas taetrolens
丁香假单胞菌
类黄假单胞菌
施氏假单胞菌

秸秆色假单胞菌 Pseudomonas straminea

猴假单胞菌   Pseudomonas simiae
土壤假单胞菌
萨氏假单胞菌   Pseudomonas salomonii
食爬虫假单胞菌   Pseudomonas reptilivora

培养:将接种后的培养基放入培养箱中，在适宜的条件下培养至细胞稳定期或得到成熟孢子。细菌培养温度一般为30～37℃，真菌培养温度一般为25～28℃。

保藏:培养好的菌种于4～6℃保存，根据要求每3～6个月移植一次。某些菌种，如芽裂酵母，阿舒假囊酵母，棉病囊霉等，须1～3个月移植一次。保藏湿度用相对湿度表示，通常为50%～70%.斜面菌种应保藏相继三代培养物以便对照，防止因意外和污染造成损失。

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