细胞培养液 在线客服 : :tongpaibio 器材与试剂：干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。 细胞培养液 具体步骤：
(1)水的制备：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水. 293T/17细胞，人胚肾细胞
3T3-L1细胞， 小鼠胚胎成纤维细胞
A172细胞，人胶质母细胞瘤细胞
A3细胞，人T淋巴细胞白血病细胞
A-375细胞，人恶性黑色素瘤细胞
A-431细胞，人表皮癌细胞
A549细胞，人非小细胞肺癌细胞
A-673细胞，人横纹肌瘤细胞
C127细胞，小鼠乳腺肿瘤细胞
BxPC-3细胞，人原位胰腺腺癌细胞
BT-549细胞，人乳腺管癌细胞
BT474细胞，人乳腺导管癌细胞
BRL 3A细胞，大鼠肝细胞
BRL细胞，大鼠肝细胞
BNL CL.2细胞，小鼠胚胎肝细胞
细胞培养液 (2)PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：
1.溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，KH2PO4 0. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。
BGC-823细胞，人胃腺癌细胞
BEL-7405细胞，人肝癌细胞
BEL-7404细胞，人肝癌细胞
BEL-7402细胞，人肝癌细胞
Bcap-37细胞，人乳腺癌细胞
B95-8细胞，绒猴EBV 转化的白细胞
B16细胞，小鼠黑色素瘤细胞
AsPC-1细胞,人转移胰腺腺癌细胞
COLO-320细胞，人结肠腺癌细胞
2.移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。 (3) 胰蛋白酶溶液的配制与消毒：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力zui强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2 、Mg2 和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2 、Mg2 的BSS，如：D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
A7r5细胞， 大鼠胸大动脉平滑肌细胞
A9细胞，小鼠皮下结缔组织细胞
Acc-2细胞,人涎腺腺样囊性癌细胞
Acc-3细胞,人涎腺腺样囊性癌细胞
AGS细胞,人胃腺癌细胞
Ana-1细胞,小鼠巨噬细胞
AR42J细胞,大鼠胰腺外分泌细胞
1.称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。搅拌混匀，置于4℃内过夜。
2.用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。 (4)青、链霉素溶液的配制于消毒
1. 所用纯净水（双蒸水）需要15磅高压20分钟灭菌。
2.具体操作均在超净台内完成。青霉素是80万单位/瓶，用注射器加4ml灭菌双蒸水。链霉素是100万单位/瓶，加5ml灭菌双蒸水，即每毫升各为20万单位。
3.使用时溶入培养液中，使青链霉素的浓度zui终为100单位/ml。1单位＝1微克？
(5).RPMI1640的制备与消毒：
1.溶解、调PH值、定容：先将培养基粉剂加入培养液体积2/3的双蒸水中,并用双蒸水冲洗包装袋2-3次(冲洗液一并加入培养基中),充分搅拌至粉剂全部溶解,并按照包装说明添加一定的药品.然后用注射器向培养基中加入配制好的青链霉素液各0.5ml,使青链霉素的浓度zui终各为100单位/ml。然后用一个当量的盐酸和NaOH调PH到7.2左右。zui后定容至1000ml，摇匀。
2.安装蔡式滤器：安装时先装好支架，按规定放好滤膜，用螺丝将不锈钢滤器和支架连接好。然后卸下支架腿分别用布
包好待消毒。
3.抽滤：配制好的培养液通常用滤器过滤除菌。通常用蔡式滤器在超净工作台内过滤。
4.分装：将过滤好的培养液分装入小瓶内置于4℃冰箱内待用。
5.使用前要向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液（4℃时两周有效）。 (6)血清的灭活：细胞培养常用的是小牛血清，新买来的血清要在56℃水浴中灭火30分钟后，再经过抽滤方可加入培养基中使用。 (7)HEPES溶液：
HEPES的化学全称位羟乙基呱嗪乙硫磺酸（N’-a-hydroxythylpiperazine-N’- ethanesulfanic acid）。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L，一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。 1mol/L HEPE缓冲液配制方法如下：准确称取HEPTS 238.3g，加入新鲜三蒸水定容至1L。过滤除菌，分装后4℃保存。 注意：因为现在市售HEPES为约10g包装的小瓶，所以可根据实际情况灵活配制，但是要保证培养液内HEPES的终浓度仍然为20m mol/L。如：称取4.766克HEPES溶于20ml三蒸水中，过滤除菌后可*（20ml）加入1L培养液中，或者每100ml培养液中加入2ml即可。 COLO 205细胞，人结肠癌细胞
CNE细胞，人鼻咽癌细胞
CHL细胞，仓鼠肺细胞
CGM1细胞，人EB 病毒转化的B细胞
CFPAC-1细胞，人胰腺癌细胞
CCRF CEM细胞，人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞 |
