病原分离

更新时间：2015-08-06

浏览次数：1255

病原分离

（1）病料的采集：zui急性和急性病例可采集死亡禽只的肝、脾、心血；慢性病例一般采集局部病灶组织；对不新鲜或已被污染的样品，可自骨髓中采取病料。采病料时用烧红的刀片烧烙组织，而后用灭菌棉拭子或接种环通过烧烙表面插入组织或心血内取样。如果为活禽，可通过鼻孔挤出粘液，或将棉拭子插入鼻裂中取样。
（2）培养基制备：马丁琼脂培养基（本实验中采用该培养基）、5％鸡血清葡萄糖淀粉琼脂、鲜血琼脂培养基。
（3）动物接种：如果病料污染严重，则可将0.2mL碾碎的病料，经皮下或腹腔内接种家兔、小鼠或易感鸡，接种动物在24h～48h内死亡，可以从肝脏、心血中分离到巴氏杆菌。
（4）培养：将病料接种于马丁琼脂培养基在35℃～37℃下培养，经18h～24h培养后菌落直径为1mm～3mm，菌落呈散在、圆形，表面凸起呈奶滴状。

病原分离 观察家禽巴氏杆菌病的临诊表现和病理解剖变化掌握禽巴氏杆菌病的微生物学诊断方法

实验内容或原理：根据典型症状和病变，以及在显微镜下检查组织涂片发现的两极染色的杆菌，可初步诊断本病。但确诊应依靠病原分离鉴定，鉴定原理为革兰氏染色法。

需用的仪器或试剂等：动物：鸡、小白鼠
器材：外科镊子、外科剪、灭菌纱布、载玻片、糖发酵管等。
药品：草酸铵结晶紫、革兰氏碘、碳酸复红、瑞特氏染液、美蓝染液、棉拭子、接种环、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、甘露醇、鼠李糖、戊醛糖、纤维二糖、绵子糖、菊糖、赤藓糖、戊五醇、M—肌醇、水杨苷。胰蛋白酶、L-胱胺酸、琼脂粉、酚红。

实验步骤

一、临床症状和病理变化症状

急性症状:描述慢性症状:描述病理变化:描述

二、微生物学诊断
抹片的制备:用镊子夹持病变组织肝或脾，然后以灭菌剪刀剪取小块，夹出后将其新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层；

若取血液，用灭菌剪刀剪开心脏进行蘸取或剪取凝血块，用新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层。自然干燥。将干燥好的抹片，涂抹面向上，以其背面在酒精火焰上来回通过数次，略作加热进行固定。

革兰氏染色法:固定好的抹片上滴加草酸铵结晶紫色液，染色2min→水洗+加革兰氏碘溶液于抹片上媒染2min→水洗→加95％酒精于抹片上脱色1min→水洗→加稀释碳酸复红复染30s→水洗→吸干→镜检。巴氏杆菌为革兰氏阴性球杆菌或短杆菌，单个或成对存在，常有荚膜。
其他染色法:甲醇固定，瑞特氏或美蓝染色呈两极浓染的菌体。