ATCC细胞  细胞接种或传代以后，实验者每天或至多间隔1～2d，要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化，做换液或传代处理，如发现异常情况应及时采取措施。

细胞形态:生长状态良好的细胞，在一般显微镜下观察时可见，细胞透明度大、折光性强、轮廓不清。细胞生长不良时，轮廓增强，胞质中常出现空泡、脂滴和其他颗粒状物，细胞之间空隙加大，细胞形态可变得不规则甚至失去原有特点，如上皮细胞变成类上皮细胞等。某些染料当细胞死亡时能透过变性的胞膜与解体的细胞核DNA结合，而令其着色。因而常用台盼蓝(trypan blue) 鉴别细胞死活，活细胞不着色，死细胞核呈蓝色。通派（上海）细胞库：www.shtpbio。。ｃｏｍ

ATCC细胞 细胞生长:初代培养或传代的细胞悬液接种以后，经过长短不同的潜伏期后开始增殖。传代细胞系、胚胎组织或幼体组织一般在第二天即可见细胞生长，一周内便可连接成片。接种细胞长满瓶壁后，应及时做再培养。否则由于营养物消耗和代谢积累，细胞即进入停止期或退化期。此时细胞轮廓增强，细胞内常出现颗粒状堆积物，为膨胀的线粒体，细胞质呈空泡化，细胞变圆、粗糙，严重时细胞从瓶壁脱落，只有及时再做传代处理，才能使细胞继续生长繁殖。

ATCC细胞营养液 正常情况下，培养液呈桃红色。如果细胞维持在pH6.5～6.6条件下，细胞会脱落死亡。当培养液酸化变黄时，说明培养液中代谢产物已堆积到一定量，需要更换新鲜培养液。培养液中如加Hepes或用5％CO2温箱培养可使pH维持相对稳定。更换营养液的时间，可依营养物的消耗而定，细胞生长旺盛时2～3d换一次，生长缓慢时，3～4d亦可。要特别注意各种细胞对pH值要求是不一样的。

微生物污染 微生物污染培养细胞培养物后会出现pH值改变，培养液呈现混浊状。细菌感染后，由于细菌的运动，光镜观察可见有微闪光；真菌感染则在镜下见许多细丝状菌丝，有时还密集有群集孢子；支原体的污染需要借助一些检测手段才可检出。细胞污染以后一般应当废弃，对于重要的细胞株，可以参考相关专著，介绍采取一些措施清除污染。比较重要的实验、珍贵的细胞，至少由两个实验人员独立培养操作，或由一个人分次(不同时)操作。除培养实验室的卫生条件外，空气中的湿度与微生物污染关系密切。重要的、周期长的实验尽量安排在空气湿度低的秋冬季进行。

体内细胞培养及其操作步骤

1． 瘤细胞悬液接种
（1）无菌选取生长良好(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞。   
（2）在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经80～100目筛网过滤成细胞悬液。
（3）培养细胞应用PBS洗两遍。
（4）计数并调整细胞浓度至107～108／ml。
（5）常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(0.1ml／部位，＞106细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些。
（6）次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，zui后固定为一个相对稳定的时间。
2． 腹水瘤的建立与腹水瘤的接种 将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。
（1）将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数。
（2）消毒动物，左下腹穿刺接种106腹水瘤细胞。
（3）接种腹水瘤细胞后约7~12d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。
（4）抽取的腹水经3000rpm离心15min，收集上清，分装冻存备用。