人神经胶质细胞瘤细胞 U251细胞

更新时间：2015-11-05

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B淋巴细胞分离技术
实验原理:膜表面免疫球蛋白(SmIg)，是B细胞*的表面标志，它既是B细胞识别抗原的受体，与相应抗原特异性结合；又是表面抗原，能与相应的抗Ig的抗体结合，故可用荧光标记的抗Ig抗体作免疫荧光镜检，以查出B淋巴细胞。

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小鼠垂体瘤细胞AtT-20 AtT20细胞
非洲绿猴肾细胞VERO细胞
人组织细胞淋巴瘤细胞U937 U-937细胞
人神经胶质细胞瘤细胞U251细胞
人急性单核细胞白血病细胞THP-1细胞
人结直肠癌细胞T84细胞

由于B淋巴细胞在分化过程中zui先出现SmIg，所以该法可以检出全部B淋巴细胞。B淋巴细胞表面zui先出现IgM，以后相继出现IgG、IgD、IgA等表面免疫球蛋白。

人慢性髓系白血病细胞K562细胞
人前列腺癌细胞LNCaP细胞
人乳腺癌细胞MCF 7B细胞
小鼠红白血病细胞MEL细胞
人急性淋巴母细胞性白血病细胞MOLT-4细胞
人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞
人小细胞肺癌细胞NCI-H209细胞
人Burkitt淋巴瘤细胞Raji细胞

而金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)能与许多哺乳动物IgG的Fc段发生结合，并且这种反应也发生于膜表面的IgG，所以亦可以用荧光标记的SPA菌体(FITCSPA)替代FITC抗IgG检测SmIg阳性B淋巴细胞，凡于FITCSPA结合的细胞，在荧光显微镜下，可见到B淋巴细胞表面或周围布满许多呈黄绿色荧光的菌体，即为SmIg阳性细胞即为B淋巴细胞。现将荧光标记SPA法介绍如下：

人横纹肌肉瘤细胞A-204细胞
人肺腺癌细胞Calu-3细胞
非洲绿猴肾细胞（SV40转化）COS-7 COS7细胞
人肾癌Wilms细胞G401细胞
人肝癌细胞Hep G2 HepG2细胞
人包皮成纤维细胞HFF细胞
人早幼粒急性白血病细胞HL-60细胞
人骨肉瘤细胞HOS细胞

实验材料:
1 冻干荧光金黄色葡萄球菌A蛋白(FITCSPA)菌体试剂，用时按要求稀释。
2 pH值72 Hanks液，含5%小牛血清。
3 淋巴细胞分层液，20℃时比重为1077±0002
4吸管、移液管、台式离心机、载玻片、盖玻片
三、实验步骤
1、取肝素抗凝血2ml，用Hanks液稀释1～2倍，轻轻加入到装有3ml淋巴细胞分层液的试管中，2000～2500 r/min水平离心20～25min，获取淋巴细胞。
2、用pH值7.2Hanks液洗2次，zui终配成细胞数为2～25×106/ml的淋巴细胞悬液。用pH值72Hanks液稀释FITCSPA菌体试剂，然后将淋巴细胞液与等量的FITCSPA菌体悬液混合，充分混匀后，放4℃冰箱30min。
3、再用经37℃预热的Hanks液(含5%小牛血清)洗涤离心
4、取沉淀细胞滴加在载玻片上，覆以盖玻片，在荧光显微镜下观察。

结果观察:凡淋巴细胞表面粘附5个以上菌体细胞为SmIg阳性。一般先用暗视野计算荧光阳性细胞数，继用明视野计算同一视野中淋巴细胞总数。

每份标本至少计算200个淋巴细胞，并求出荧光阳性细胞百分率，同时按原血标本中淋巴细胞的总数计算B淋巴细胞的值。同时，每个B淋巴细胞表面可带有不同类别的Ig，即IgM、IgG、IgA等，如果分别用单价荧光抗Ig血清染色，则可鉴定不同Ig的B淋巴细胞。

人胰腺癌细胞PANC-1细胞
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC-12 PC12细胞
人成骨肉瘤细胞Saos-2细胞
人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞
人卵巢腺癌细胞SK-OV-3 SKOV3细胞
人骨肉瘤细胞U-2 OS U2OS；U2-OS；U-2OS细胞
小鼠血细胞WEHI-3细胞 WEHI3
小鼠成纤维细胞Φ2细胞

但淋巴细胞数量的多少会影响检出率。过多或过少时，除难以计数外，染色背景明暗不匀，着色与不着色的细胞难以区别，一般以2～25×106/ml细胞浓度为宜，活细胞数应不少于95%。

实验分析:此法特异性强，荧光亮度好，操作迅速简便。加上试剂有商品供应，可以使本法标准化。
一般SmIg阳性的B淋巴细胞表面或周围均可布满许多黄绿色荧光菌体，很少见到表面只粘附2～3个菌体细胞同时，每个B淋巴细胞表面可带有不同类别的Ig，即IgM、IgG、IgA等，如果分别用单价荧光抗Ig血清染色，则可鉴定不同Ig的B淋巴细胞。

人乳腺癌细胞MDA-MB-435S细胞
小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3细胞
人恶性多发性畸胎瘤细胞NTERA-2细胞
小鼠睾丸畸胎瘤细胞P19细胞
人卵巢畸胎瘤细胞PA-1细胞
小鼠胚胎成纤维细胞PA12细胞
淋巴细胞数量的多少会影响检出率。过多或过少时，除难以计数外，染色背景明暗不匀，着色与不着色的细胞难以区别，一般以2～25×106/ml细胞浓度为宜，活细胞数应不少于95%。
实验注意事项:当SmIg抗体发生结合时，由于抗血清为双价，使SmIg出现交联现象，这种抗原与抗体结合物可连成斑点和帽状，时间过长，帽状结合物可脱落或被吞饮而消失，因此染色后，观察时间不能超过30min，或在染色时加叠氮钠防止帽状物形成或被吞饮。
在滴片前要*去除游离的抗体，以避免假阳性结果