Caco-2细胞人结直肠腺癌细胞

更新时间：2015-11-06

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测定细胞相对数和相对活力

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试剂材料准备与实验仪器
1）对数生长期细胞
2）受试因素（药物）
3）MTT：以PBS配制成5mg /ml，抽滤除菌，保存在4?C
4）DMSO（二甲基亚砜）
5）96孔板
6）酶联免疫检测仪
7）细胞培养箱

实验步骤（适用于贴壁细胞）
1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，分于96孔板，1×104/孔，细胞浓度可以调整。
2）置37℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁。
3）加入不同浓度的药物，如1、5、10、40、50、80、160、320mg/ml的药物，时间依据实验需要，一般3天。
4）小心吸去上清，PBS轻轻洗涤，再次离心，弃上清。
5）每孔加入180 ul新鲜RPMI 1640培养液，再加入20 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。
6）终止培养（可离心，1000 rpm，10 min），小心吸去孔内培养液。
7）每孔加入150 ul二甲基亚砜（也可以用酸化异丙醇，10%SDS代替），置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490 nm处测量各孔的吸光值。
8）同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定3复孔。

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