肺癌细胞 H1299细胞

更新时间：2015-11-19

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肿瘤细胞在体外仍具有迁移的能力，本实验借鉴体外细胞致伤愈合实验模型，利用细胞划痕法测定了肿瘤细胞的运动特性。

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仪器和试剂:
1）细胞系及其培养：肝肿瘤细胞HepG2
2）24孔板，移液器，倒置显微镜，
3）主要试剂：PBS，DMEM培养液，0.25%胰酶，胎牛血清，5-氟尿嘧啶溶液（1ug/ml）

实验步骤:
1. 5-氟尿嘧啶溶液的配制,精密称取10mg用灭菌蒸馏水溶解，定容于100ml容量瓶，精密移取1ml溶液，稀释至100ml，即得1ug/ml 5-氟尿嘧啶溶液。
2．制备单层细胞
将细胞密度为5~10×105 个/mL的Hep G2细胞铺于24孔板（每孔500 uL）上，加入含10％胎牛血清的RMPI.1640 培养液，培养16~24 h,使形成单层细胞。
3．划痕
以五氟尿嘧啶（5－Fu）为例，首先配制1 μg/μL的母液，取45 μL该母液用PBS稀释至1.1 mL，得到浓度为40 μg/ML的5－Fu溶液。
用10 uL移液枪枪头（或者无菌牙签）在单层细胞上呈“一"字划痕，用PBS清洗3次，然后加入上面配好的5－Fu溶液，平行两个样本，孵育24 h后换成含10％胎牛血清的RMPI.1640 培养液，孵育24 h。
4．观察并拍照
吸去培养液，用PBS清洗3次后，在倒置荧光显微镜下观察并拍照。

注意事项：
1．实验时应注意细胞生长状况，选择适当的细胞接种浓度。对不同的细胞要观察细胞的贴壁率等，确定实验时细胞的接种数量和培养时间，保证培养终止时密度适当。
2．在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。
3．在药物的筛选过程中，其对细胞迁移能力的影响也是重要的一方面。实验设计过程中需要选择适当的阳性对照组和阴性对照组。

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