乳腺癌细胞 Hs578T细胞

更新时间：2015-12-04

浏览次数：1017

乳腺癌细胞 Hs578T细胞

质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(＜10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。

在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。

人非小细胞肺癌细胞，NCI-H358细胞（T25培养瓶@密度75%
人非小细胞肺癌细胞，HCC827细胞（T25培养瓶@密度75%）
人典型小细胞肺癌细胞，NCI-H1688细胞（T25培养瓶@密度75%）
人非小细胞肺癌细胞，NCI-H1299细胞（T25培养瓶@密度75%）
通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来zui大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。

外源DNA片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种：

带有非互补突出端的片段用两种不同的限制性内切酶进行消化可以产生带有非互补的粘性末端,这也是zui容易克隆的DNA片段，一般情况下,常用质粒载体均带有多个不同限制酶的识别序列组成的多克隆位点，因而几乎总能找到与外源DNA片段末端匹配的限制酶切位点的载体，从而将外源片段定向地克隆到载体上。也可在PCR扩增时，在DNA片段两端人为加上不同酶切位点以便与载体相连。

人大细胞肺癌细胞，NCI-H661细胞（T25培养瓶@密度75%）
人肺黏液上皮样癌细胞，NCI-H292细胞
人肺退行性癌细胞，Calu-6细胞（T25培养瓶@密度75%）
人肺腺癌细胞，NCI-H1395细胞（T25培养瓶@密度75%）

带有相同的粘性末端用相同的酶或同尾酶处理可得到这样的末端。由于质粒载体也必须用同一种酶消化，亦得到同样的两个相同粘性末端，因此在连接反应中外源片段和质粒载体DNA均可能发生自身环化或几个分子串连形成寡聚物, 而且正反两种连接方向都可能有。

所以，必须仔细调整连接反应中两种DNA的浓度, 以便使正确的连接产物的数量达到zui高水平。还可将载体DNA的5'磷酸基团用碱性磷酸酯酶去掉, zui大限度地抑制质粒DNA的自身环化。带5'端磷酸的外源DNA片段可以有效地与去磷酸化的载体相连, 产生一个带有两个缺口的开环分子,在转入E. coli受体菌后的扩增过程中缺口可自动修复。

人肺腺癌细胞 SPC-A1细胞规格（T25培养瓶@密度75%）
人肺癌细胞 A549细胞规格（T25培养瓶@密度75%）
人非小细胞肺癌细胞 H125细胞规格（T25培养瓶@密度75%）
人肺癌细胞 H1299细胞规格（T25培养瓶@密度75%）
人肺癌细胞 TKB-1细胞规格（T25培养瓶@密度75%）
人肺腺癌细胞，LTEP-a-2细胞规格（T25培养瓶@密度75%）
人肺腺癌细胞，Lu-165细胞规格（T25培养瓶@密度75%）
人大细胞肺癌细胞，NCI-H460细胞规格（T25培养瓶@密度75%）
人肺腺癌细胞，SPC-A-1细胞规格（T25培养瓶@密度75%）
人高转移肺癌细胞，095-D细胞（T25培养瓶@密度75%）
人肺鳞癌细胞，SK-MES-1细胞（T25培养瓶@密度75%）

细胞库细胞种类齐全，上信息发布数量有限，为了能及时快速确认您所需要的细胞是否提供，请*时间细胞库管理员：（，）