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Southern Blot原理及实验方法 SDS-PAGE实验注意事项:
1.SDS与蛋白质的结合按质量成比例(即:1.4gSDS/g蛋白质),蛋白质含量不可以超标,否则SDS结合量不足。
2. 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时,必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。并且SDS-PAGE测定分子量有10%误差,不可*信任。
Calu-6细胞 人退行性癌细胞
CBRH-7919细胞 大鼠肝癌细胞
CCD-1095Sk细胞人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞
CEM/C1细胞 人急性淋巴细胞白血病细胞
CFPAC-1细胞 人胰腺癌细胞
CGM1细胞 人EB病毒转化的B细胞
3. 有些蛋白质由亚基(如血红蛋白)或两条以上肽链(α-胰凝乳蛋白酶)组成的,它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。因此,对于这一类蛋白质,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量。
4. 有的蛋白质(如:电荷异常或结构异常的蛋白质;带有较大辅基的蛋白质)不能采用该法测相对分子量。
Chang liver细胞 人张氏肝细胞
CHL细胞仓鼠肺细胞
CNE细胞 人鼻咽癌细胞
COLO 205细胞人结肠癌细胞
COLO 320DM细胞 人结直肠腺癌细胞
COLO-320细胞 人结肠腺癌细胞
5. 如果该电泳中出现拖尾、染色带的背景不清晰等现象,可能是SDS不纯引起。
印迹法:是指将样品转移到固相载体上,而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。
1975年,Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上,并利用DNA-RNA杂交检测特定的DNA片段的方法,称为Southern印迹法。
而后人们用类似的方法,对RNA和蛋白质进行印迹分析,对RNA的印迹分析称为Northern印迹法,对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法,对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法
Western Blot基本原理:在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体,然后用这种多肽的特异抗体来检测.
COS-1细胞 非洲绿猴SV40转化的肾细胞
COS-7细胞 非洲绿猴SV40转化的肾细胞
CRFK细胞猫肾细胞
CT26.WT细胞小鼠结肠癌细胞
CTLA4 Ig-24细胞 中国仓鼠卵巢细胞
CTLL-2细胞 小鼠T细胞
SDS-PAGE原理:SDS 是一种离子性的界面活性剂,它有强离子性的硫酸根离子也带有疏水性的长碳链.当 SDS 与蛋白质混合时,它会以其碳链与蛋白质之疏水性胺基酸结合将蛋白质包起来,而以硫酸根离子外露与水分子作用.大多数蛋白质和 SDS 的平均结合量是 1:1.4 (以重量为单位),而蛋白质结合固定比例之 SDS 後,由於 SDS 带强负价,使蛋白质原先的带电价微不足道,且每单位重量之蛋白质带电价一致(charge density),所以决定不同蛋白的泳动速率就只剩下分子大小一项因素
CW-2细胞 人结肠腺癌细胞
Dami细胞人巨核细胞白血病细胞
Daudi细胞 人Burkitt's淋巴瘤细胞
DH82细胞 狗肾恶性组织细胞增生症细胞
DLD-1细胞 人结直肠腺癌上皮细胞
DU 145细胞 人前列腺癌细胞
EA.hy926细胞 人脐静脉细胞融合细胞
EBTr (NBL-4)细胞 牛胚气管细胞
Eca-109细胞 人食管癌细胞
EL4细胞 小鼠淋巴瘤细胞
EL4.IL-2细胞 小鼠淋巴瘤细胞
ES-2细胞人卵巢透明细胞癌
F81细胞猫肾细胞
F9细胞 小鼠畸胎瘤细胞
FaDu细胞人咽鳞癌细胞
FO细胞小鼠骨髓瘤细胞
FRhK-4细胞 恒河猴胚肾细胞
GBC-SD细胞 人胆囊癌细胞
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Capan-1胰腺癌细胞(Capan-1细胞株) ST细胞(ST传代细胞库) SP2/o细胞(SP2/o小鼠骨髓瘤细胞) Y-1 GFP细胞 Y-1 GFP肾上腺皮质细胞 SNU449细胞(SNU449肝癌细胞库)服务与支持
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