人胚肺二倍体细胞 HEL-2

更新时间：2015-12-24

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单核苷酸多态性（SNP）实验

SNP即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性。据估计，在人类基因组中，大约每千个碱基中有一个SNP，无论是比较于度多态性分析还是微卫星标记，都要广泛得多。
实验方法原理：
SNP即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性。据估计，在人类基因组中，大约每千个碱基中有一个SNP，无论是比较于限制性片段长度多态性分析还是微卫星标记，都要广泛得多。

人胰腺导管癌细胞CFPAC-1
人食管癌细胞EC109
人食管癌细胞NEC
人结肠腺癌细胞LS 180
人结直肠腺癌瘤株HCT 116
人结直肠腺癌细胞COLO 201
SNP是我们考察遗传变异的zui小单位,据估计，人类的所有群体中大约存在一千万个SNP位点。一般认为，相邻的SNPs倾向于一起遗传给后代。于是，我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位位点称作单体型。
大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型（每个具有至少5%的频率），它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。一个染色体区域可以有很多SNP位点，但是我们一旦掌握了这个区域的单体型，就可以只使用少数几个标签SNPs(tagSNP)来进行基因分型，获取大部分的遗传多态模式。

人肺巨细胞癌高转移细胞株PG-BE1
人肺巨细胞癌低转移细胞株PG-LH7
人肺癌细胞A-427
人低分化肺腺癌细胞SK-LU-1
实验材料：
组织样品
试剂、试剂盒：
液氮、PBS、GA缓冲液、GB缓冲液、蛋白酶K、无水乙醇、蛋白液、漂洗液等
仪器、耗材：
离心管、离心机、废液收集管、吸附柱、水浴锅、分光光度计、低温冰箱等

实验步骤：
一、DNA抽提
1. 取新鲜肌肉组织约100 mg，PBS漂洗干净，置于1.5 ml离心管中，加入液氮，迅速磨碎。
2. 加200 μl 缓冲液GA，震荡至*悬浮。加入20 μl 蛋白酶K（20 mg/ml）溶液，混匀。
3. 加220 μl 缓冲液GB，充分混匀，37℃消化过夜，溶液变清亮。加220 μl 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

人肺细胞HLF-a
人小细胞肺癌细胞DMS 153
人胚肺细胞 VA13细胞WI-38 VA13亚系 2RA
人胚肺二倍体细胞HEL-1
4. 将上述一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB 中，（吸附柱放入废液收集管中）12 000 rpm 离心30 秒，弃掉废液。
5. 加入500 μl 去蛋白液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12 000 rpm 离心30 秒，弃掉废液。
6. 加入700 μl 漂洗液GW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12 000 rpm离心30 秒，弃掉废液。加入500 μl 漂洗液GW，12 000 rpm 离心30 秒，弃掉废液。将吸附柱CB 放回废液收集管中，12 000 rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液。

人小细胞肺癌细胞NCI-H446
人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H157
人肺鳞癌细胞NCI-H520
人肺支气管癌细胞NCI-H1650
人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H1975
7. 将吸附柱CB 转入一个干净的离心管中，加入100 μl 洗脱缓冲液（洗脱缓冲液应在60-70℃水浴预热），混匀，室温放置15 分钟，12 000 rpm 离心30 秒。洗脱第二次，将洗脱缓冲液50 μl 加入吸附柱中，室温放置15 分钟，12 000 rpm 离心30 秒。
8. 采用Beckman DU 640 spectrophotometer 检测提取到的基因组DNA 浓度，在OD260 处有显著吸收峰。同时检测纯度，OD260/280 的值应为为1.7-1.9。
9. 从原液中取出相应体积DNA 溶液，稀释致50 ng/ul，原液置于-70℃保存，稀释液置于-20℃保存。

人胚肺成纤维细胞MRC-5
人胚肺成纤维细胞CCC-HPF-1
人胚胎气管组织来源细胞CCC-HBE-2
人胚胎肺成纤维细胞WI-38
SV-40Z转化肺成纤维细胞WI38/VA13
人胚肺二倍体细胞2BS
人胚肺二倍体细胞KMB-17
人胚肺细胞系KuMA
人肺转化细胞系AE1201
人肺鳞癌细胞NCI-H226
人胚肺二倍体细胞HEL-2
人支气管上皮样细胞BEAS-2B
人胚肺转化细胞SL-1
人肺腺癌细胞Calu-3
人小细胞肺癌细胞NCI-H209
人低分化肺腺癌细胞GLC-82
人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H2087
人小细胞肺癌细胞NCI-H2227
人非小细胞肺癌细胞NCI-H23
人胚胎心肌组织来源CCC-HEH-2
人脐静脉内皮细胞HUV-EC-C
人脐静脉内皮细胞（人膀胱癌细胞污染）ECV-304
血管平滑肌细胞T/G HA－VSMC
人胚胎心脏成纤维样细胞HEH2
人结直肠腺癌细胞HCT 116
人结直肠腺癌细胞LoVo
人胰腺腺泡上皮癌HPAC
人结直肠腺癌细胞SW620
人胰腺癌细胞AsPC-1
人胃癌细胞MKN-45
人胃腺癌细胞SGC-7901

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