人肺癌细胞 A-427

更新时间：2015-12-24

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单核苷酸多态性（SNP）实验

SNP即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性。据估计，在人类基因组中，大约每千个碱基中有一个SNP，无论是比较于度多态性分析还是微卫星标记，都要广泛得多。
实验方法原理：
SNP即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态性。据估计，在人类基因组中，大约每千个碱基中有一个SNP，无论是比较于限制性片段长度多态性分析还是微卫星标记，都要广泛得多。

人胃腺癌细胞SGC-7901
人胰腺导管癌细胞CFPAC-1
人食管癌细胞EC109
人食管癌细胞NEC
人结肠腺癌细胞LS 180
人结直肠腺癌瘤株HCT 116
人结直肠腺癌细胞COLO 201
SNP是我们考察遗传变异的zui小单位,据估计，人类的所有群体中大约存在一千万个SNP位点。一般认为，相邻的SNPs倾向于一起遗传给后代。于是，我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的SNP等位位点称作单体型。

人胚肺二倍体细胞HEL-2
人支气管上皮样细胞BEAS-2B
人胚肺转化细胞SL-1
人肺腺癌细胞Calu-3
人小细胞肺癌细胞NCI-H209
人低分化肺腺癌细胞GLC-82
大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型（每个具有至少5%的频率），它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。一个染色体区域可以有很多SNP位点，但是我们一旦掌握了这个区域的单体型，就可以只使用少数几个标签SNPs(tagSNP)来进行基因分型，获取大部分的遗传多态模式。

人胚胎心脏成纤维样细胞HEH2
人结直肠腺癌细胞HCT 116
人结直肠腺癌细胞LoVo
人胰腺腺泡上皮癌HPAC
人结直肠腺癌细胞SW620
人胰腺癌细胞AsPC-1
人胃癌细胞MKN-45
实验材料：
组织样品
试剂、试剂盒：
液氮、PBS、GA缓冲液、GB缓冲液、蛋白酶K、无水乙醇、蛋白液、漂洗液等
仪器、耗材：
离心管、离心机、废液收集管、吸附柱、水浴锅、分光光度计、低温冰箱等

实验步骤：
一、DNA抽提
1. 取新鲜肌肉组织约100 mg，PBS漂洗干净，置于1.5 ml离心管中，加入液氮，迅速磨碎。
2. 加200 μl 缓冲液GA，震荡至*悬浮。加入20 μl 蛋白酶K（20 mg/ml）溶液，混匀。
3. 加220 μl 缓冲液GB，充分混匀，37℃消化过夜，溶液变清亮。加220 μl 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

人胚肺成纤维细胞MRC-5
人胚肺成纤维细胞CCC-HPF-1
人胚胎气管组织来源细胞CCC-HBE-2
人胚胎肺成纤维细胞WI-38
SV-40Z转化肺成纤维细胞WI38/VA13
4. 将上述一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB 中，（吸附柱放入废液收集管中）12 000 rpm 离心30 秒，弃掉废液。
5. 加入500 μl 去蛋白液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12 000 rpm 离心30 秒，弃掉废液。

人小细胞肺癌细胞NCI-H2227
人非小细胞肺癌细胞NCI-H23
人胚胎心肌组织来源CCC-HEH-2
人脐静脉内皮细胞HUV-EC-C
6. 加入700 μl 漂洗液GW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12 000 rpm离心30 秒，弃掉废液。加入500 μl 漂洗液GW，12 000 rpm 离心30 秒，弃掉废液。将吸附柱CB 放回废液收集管中，12 000 rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液。
7. 将吸附柱CB 转入一个干净的离心管中，加入100 μl 洗脱缓冲液（洗脱缓冲液应在60-70℃水浴预热），混匀，室温放置15 分钟，12 000 rpm 离心30 秒。洗脱第二次，将洗脱缓冲液50 μl 加入吸附柱中，室温放置15 分钟，12 000 rpm 离心30 秒。

人肺癌细胞A-427
人低分化肺腺癌细胞SK-LU-1
人肺支气管癌细胞NCI-H1650
人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H1975
人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H2087
8. 采用Beckman DU 640 spectrophotometer 检测提取到的基因组DNA 浓度，在OD260 处有显著吸收峰。同时检测纯度，OD260/280 的值应为为1.7-1.9。
9. 从原液中取出相应体积DNA 溶液，稀释致50 ng/ul，原液置于-70℃保存，稀释液置于-20℃保存。

人胚肺二倍体细胞2BS
人胚肺二倍体细胞KMB-17
人肺细胞HLF-a
人小细胞肺癌细胞DMS 153
人胚肺细胞 VA13细胞WI-38 VA13亚系 2RA
人胚肺二倍体细胞HEL-1
人胚肺细胞系KuMA
人肺转化细胞系AE1201
人肺鳞癌细胞NCI-H226
人小细胞肺癌细胞NCI-H446
人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H157
人肺鳞癌细胞NCI-H520
人肺巨细胞癌高转移细胞株PG-BE1
人肺巨细胞癌低转移细胞株PG-LH7
人脐静脉内皮细胞（人膀胱癌细胞污染）ECV-304
血管平滑肌细胞T/G HA－VSMC

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