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ACP核酸检测(PCR荧光探针法)
实验目的:检测动物肺脏、淋巴结等组织中鹦鹉热衣原体(ACP)DNA,用于鹦鹉热衣原体(ACP)感染的辅助诊断及流行病学调查。其检测结果仅供参考。
实验方法:选取一对ACP特异性引物和一条特异性荧光探针,应用碱裂解法提取DNA,在耐热DNA聚合酶(Taq酶)作用下,配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体(dNTPs)等成分,通过PCR-荧光探针体外扩增法对鹦鹉热衣原体(ACP)一段高保守区域进行扩增,从而达到快速实时定量检测之目的。
动物组织标本采集:取发病动物肺脏、淋巴结等组织1g左右,转至1.5ml离心管中,密闭送检。
提取组织:取约100mg组织加1ml生理盐水,研磨成组织匀浆,取50ul匀浆液转至一洁净的1.5ml离心管中。
组织DNA提取:向标本中加入50ul核酸提取液充分混匀,100℃烈解10min。13,000rpm 离心3min,取上清液4ul做PCR反应。
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