CIA-FLS细胞培养（大鼠关节滑膜成纤维细胞）

更新时间：2023-11-24

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细胞：CIA-FLS细胞

中文名称：大鼠关节滑膜成纤维细胞

生长特性：贴壁细胞

培养基：1640培养基血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

荧光株：CIA-FLS-RFP荧光标记细胞株 CIA-FLS-GFP荧光标记细胞株 CIA-FLS-LUC荧光标记细胞株

耐药株：CIA-FLS-DDP耐药株 CIA-FLS-PTX耐药株 CIA-FLS-ADM耐药株

细胞检测服务：CIA-FLS细胞种属鉴定（细胞检测技术服务可直接咨询客服）

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

ACP核酸检测（PCR荧光探针法）

实验目的：检测动物肺脏、淋巴结等组织中鹦鹉热衣原体(ACP)DNA，用于鹦鹉热衣原体(ACP)感染的辅助诊断及流行病学调查。其检测结果仅供参考。

实验方法：选取一对ACP特异性引物和一条特异性荧光探针，应用碱裂解法提取DNA，在耐热DNA聚合酶（Taq酶）作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR-荧光探针体外扩增法对鹦鹉热衣原体(ACP)一段高保守区域进行扩增，从而达到快速实时定量检测之目的。

动物组织标本采集：取发病动物肺脏、淋巴结等组织1g左右，转至1.5ml离心管中。

标本预处理：

提取组织：取约100mg组织加1ml生理盐水，研磨成组织匀浆，取50ul匀浆液转至一洁净的1.5ml离心管中。

组织DNA提取：向标本中加入50ul核酸提取液充分混匀，100℃烈解10min。13,000rpm 离心3min，取上清液4ul做PCR反应。

阴性质控品：取50μl阴性质控品加入50μl核酸提取液B，充分震荡。后100℃裂解10分钟，然后13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做PCR反应。

ACP-阳性质控品：直接取4μl进行PCR扩增。或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。

贴壁细胞签收操作：

1. 收到细胞后请尽快更换为含 15% 血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10% 的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时）

2. 贴壁细胞收到后切忌立刻进行消化，将细胞换液后放置培养箱孵育 6-8 小时或过夜再做消化传代。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养血清注意事项请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）

1．吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在 1-2min）

2．镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉yi酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。

3．取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4．注意培养基 PH 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或者冻存。

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