H1944细胞培养（人非小细胞肺癌细胞）

更新时间：2023-12-01

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细胞：H1944细胞

中文名称：人非小细胞肺癌细胞

生长特性：贴壁细胞

血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）培养基：1640培养基

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）

1．吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在 1-2min）

2．镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉yi酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。

3．取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4．注意培养基 PH 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或者冻存。

支气管炎病毒(AIBV)核酸检测：RNA提取

1:样品处理

固体组织：取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆或剪刀剪碎，加入500ul RNA提取液A（Trizol reagents），研磨或振荡至匀浆状，转移到1.5ml的EP管中，室温放置5min。

培养物、试子等液体标本：将标本充分混匀，取100μ液体标本加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents）充分震荡，室温放置5min。

2:加入100ul氯仿，用力震荡15s，室温静置5min， 4℃ 13,000rpm离心5min。

3:小心将上层水相转移到干净离心管中，加300 μl 无水乙醇，另加10ul RNA提取液B（内含不溶物，使用前室温溶解并充分混匀），充分混匀，13,000rpm离心1min。

4:弃上清，加入500ul 75%的DEPC乙醇，充分混匀，13,000rpm离心1min，小心吸去大部分乙醇。

5:将提取管敞口在室温空气中干燥5min待乙醇挥发干净，用20μl DEPC H2O溶解沉淀。

阴性质控品：取100μl阴性质控品加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents）充分震荡，室温放置5min。后按2-5操作。

AIBV阳性质控品: 直接取3μl 进行PCR扩增。