HEM-a细胞传代培养(人正常黑色素细胞)

更新时间：2023-12-05

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细胞：HEM-a细胞

中文名称：人正常黑色素细胞

生长特性：贴壁

培养基：专用培养基

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

H5N1亚型(AIV-H5)核酸扩增检测

实验目的：检测咽试子和发病动物或体液、咽或泄殖腔试子或肺脏、淋巴结等组织标本以及细胞培养液中病毒H5N1亚型RNA。

实验原理：一对(AIV-H5N1)特异性引物和一条特异性荧光探针，应用Trizol提取RNA，经逆转录酶作用将RNA转录成cDNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过一步PCR-荧光探针体外扩增法对病毒H5N1亚型RNA进行扩增；

标本采集：

适用标本类型：发病动物体液、咽或泄殖腔试子或肺脏、淋巴结等组织标本；病毒细胞培养液。

标本采集：

组织：取发病动物肺、肝、脾、肺、肾、淋巴结及胰腺等组织约1g，置入1.5ml洁净EP管。

体液及培养液体：取上述标本约1ml，置入1.5ml洁净EP管。

咽及泄殖腔等试子：用棉试子取咽或泄殖腔分泌物，将试子放入盛有1.0ml PBS(或生理盐水)的离心管中。

标本运输：上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。

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