细胞：hHSC细胞 中文名称：人肝星状细胞 生长特性：贴壁 培养基：MEM培养基 血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）+1%NEAA 冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO （网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；） 细胞传代： 1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。 2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。 3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。 4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。
AIV-H5核酸扩增检测RNA提取 1）:样品处理： 固体组织：取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆或剪刀剪碎，加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents），研磨或振荡至匀浆状，转移到1.5ml的EP管中，室温放置5min。 培养物、试子等液体标本：将标本充分混匀，取100μl液体标本加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents）充分震荡，室温放置5min。 2）：加入100μl氯仿，用力震荡15s，室温静置5min， 4℃ 13,000rpm离心5min。 3):小心将上层水相转移到干净离心管中，加300 μl 异丙醇，另加10μl RNA提取液B（内含不溶物，使用前室温溶解并充分混匀），充分混匀，13,000rpm离心1min。 4）：弃上清，加入500 μl 75%的DEPC乙醇，充分混匀，13,000rpm离心1min，小心吸去大部分乙醇。 5）：将提取管敞口在室温空气中干燥5min待乙醇挥发干净，用20μl DEPC H2O溶解沉淀。 (重要提示：RNA提取液B内含不溶物，使用前请13,000瞬时离心10s) 阴性质控品：取100μl阴性质控品加入500μl RNA提取液A(Trizol reagents)充分震荡，室温放置5min。后按2-5操作。 AIV-H5阳性质控品: 直接取3μl 进行PCR扩增。
|
