细胞：H4IIE细胞 中文名称：大鼠肝癌细胞 生长特性：贴壁 培养基：MEM培养基 血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清） 冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO H4IIE细胞传代： 1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。 2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时； （可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化） 直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。 3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。 4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。 （网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；） 非洲猪瘟病毒(ASFV)核酸检测结果分析判定： 反应结束后保存检测数据文件。根据分析后图像调节baseline的start值（3-8），stop值（13-18）以及Threshold值，使Std curve 窗口下的标准曲线达到最佳（correlation数值介于-0.97~-1之间，correlation数值等同于∣r∣值），最后到Reporter窗口下记录仪器自动分析计算出的未知标本数值（Qty-Copies/ml）。 【质控标准】 阴性质控品：全部阴性。 ASFV-阳性质控品：阳性质控品的 Ct 值均应小于 35.0。 ∣r∣≥0.97（correlation数值介于-0.97~-1之间，correlation数值等同于∣r∣值）。 以上条件应同时满足 ，否则，此次试验视为无效，全部试验应重新进行。 【结果判定】 测定结果的计算： 如果Ct值﹤38，则实验样品的ASFV DNA含量(基因拷贝数/ml)= Qty-Copies/ml； 如果38﹤Ct值﹤40,为灰区建议重新检测，重新检测若38﹤Ct值﹤40判为阳性，否则为阴性。 如果Ct值=40，则ASFV DNA含量（基因拷贝数/ml）﹤5×10P2PCopies/ml (低于检测下限)。 |
