HIT-T15细胞培养（仓鼠beta胰岛β细胞）

更新时间：2024-03-30

浏览次数：365

细胞：HIT-T15细胞

中文名称：仓鼠beta胰岛β细胞

生长特性：贴壁

培养基：1640 培养基血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

HIT-T15细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

鼻疽假单胞菌(BM)核酸扩增检测：

DNA提取

标本预处理：

1：外周血淋巴细胞分离 (用户亦可用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞)将抗凝血摇匀，取500μl转至一洁净的1.5ml 离心管中，编号标记。

2：加入1ml 1×红细胞裂解液(RCLB,试剂盒配备10×RCLB，使用前请用双蒸馏水按1：9比例配制成1×RCLB)，剧烈震荡30s，3,000g离心5min，弃上清。

3：重复 1.2 两至三次至无明显红色沉淀。(若沉淀明显，请再重复步骤1.2 一次)。

4：加入1ml生理盐水，剧烈震荡15s，10000g离心5min，弃上清。

5：肺脏、皮肤及肠系膜淋巴结等固体组织：取适量(500mg)固体组织，用生理盐水洗净表面残余血液，转至研磨器中，加1ml生理盐水，研磨成组织匀浆，取50μl组织匀浆转至1.5ml洁净的离心管中。

6：呼吸道或皮肤分泌物：充分混匀上述标本，取1ml试子液转至一洁净的1.5ml离心管中，13,000g离心1min，弃上清，沉淀加1ml生理盐水，充分混匀，13,000g离心1min，弃上清。

7：DNA提取：向上述标本中加50μl核酸提取液B（内含不溶物质，用前需室温溶解并充分混匀），充分混匀，100℃裂解10min，4℃13,000g离心3min，取上清液4μl做PCR扩增。

阴性质控品：取50μl阴性质控品，加50μl核酸提取液B充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做PCR反应。

BM阳性质控品：直接取4μl进行PCR扩增，或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。