LA-4细胞培养小鼠肺癌细胞

更新时间：2024-05-11

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细胞：LA-4细胞

中文名称：小鼠肺癌细胞

生长特性：贴壁

培养基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

LA-4细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

古典猪瘟病毒(CSFV)核酸扩增检测

实验目的：适用于检测猪血清、肺、脾、肾、肠系膜及额下淋巴结等组织标本或病毒培养液中古典猪瘟病毒(CSFV)mRNA，适用于古典猪瘟病毒感染的辅助诊断及流行病学调查。其检测结果仅供参考。

实验原理：本试剂盒选取一对古典猪瘟病毒特异性引物结合一条特异性荧光探针，采用Trizol提取古典猪瘟病毒RNA，经过逆转录作用生成cDNA，后者在耐热DNA聚合酶(Taq酶)作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体(dNTPs)等成分，通过一步PCR-荧光探针体外扩增法对古典猪瘟病毒RNA进行扩增，从而达到快速实时定量检测之目的。

实验组成：

（RNA提取液B 1管 500μl/管）（逆转录酶系 1管 40μl/管）（Taq酶系 1管 40μl/管）

（CSFV–PCR MIX 1管 800μl/管）（CSFV 阳性质控品 1管 50μl/管）（阴性质控品 1管 250μl/管）

（DEPC水 1管 2000μl/管）

备注: RNA提取液A（Trizol reagents）等另行配备。

结果分析判定：

反应结束后，使用手动调整阈值使阴性质控品Ct 值在40以上，Ct值小于38个循环的为阳性；Ct值在38-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。重复试验之后，如果Ct值仍然在38-40个循环之间，判断为阳性，没有荧光值增长为阴性。

【质控标准】

阴性质控品：没有荧光值增长，全部阴性。

CSFV-阳性质控品：阳性质控品的 Ct 值均应小于30.0。

以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效，全部试验应重新进行。

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