RM细胞培养（大鼠小胶质细胞）

更新时间：2024-06-05

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细胞：RM细胞

中文名称：大鼠小胶质细胞

生长特性：贴壁细胞

培养基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

RM细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

古典猪瘟病毒(CSFV)核酸扩增检测

实验目的：适用于检测猪血清、肺、脾、肾、肠系膜及额下淋巴结等组织标本或病毒培养液中古典猪瘟病毒(CSFV)mRNA，适用于古典猪瘟病毒感染的辅助诊断及流行病学调查。其检测结果仅供参考。

实验原理：用一对古典猪瘟病毒(CSFV)特异性引物，应用Trizol提取RNA，经逆转录酶作用将RNA转录成cDNA，后者在Taq酶作用下，配以SD-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，用RT-PCR体外扩增法对古典猪瘟病毒(CSFV)RNA进行扩增，产物经凝胶电泳，溴化乙锭(EB)染色，紫外灯观察，从而达到快速检测之目的。

实验组成：

（RNA提取液B 1管 500μl/管）（CSFV RT MIX 2管 140μl/管）

（逆转录酶系 1管 40μl/管）（CSFV -PCR反应管 40管 50μl/管）

（CSFV阳性质控品 1管 50μl/管）（阴性质控品 1管 500μl/管）（DEPC水 1管 2000μl/管）

备注: RNA提取液A（Trizol reagents）等另行配备。

结果判断：阴性质控品无带出现(引物带除外)，CSFV阳性质控品出现142bp 扩增带，若被检样品出现142bp 扩增带为古典猪瘟病毒(CSFV)阳性，否则为阴性。

【质控标准】

阴性质控品：没有目的条带，全部阴性。

CSFV阳性质控品：出现目的条带（142bp)。

以上两个条件应该同时满足，否则，此次试验视为无效。

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