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细胞:mIMCD-3细胞
中文名称:小鼠肾脏内髓上皮细胞
生长特性:贴壁
培养基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
冻存条件:50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO
收到细胞后请尽快更换配套培养基,或自己配置的新鲜培养基(含15%血清),如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时)。
mIMCD-3细胞传代:
1):细胞密度约80%时,吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞(注意根据实际情况,把握消化时间)。
2):镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时;
(可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处,即可肉眼可见细胞层脱落,或吹打后镜下观察吹打处,即消化完成,否则继续消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散。
3):取部分细胞悬液转移到新的培养皿中,添加适当的培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。
4):注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。
(网络信息主针对网络推广作用,仅供参考,细胞培养请咨询细胞库管理员,以细胞库管理员提供给您的信息为准,操作前,如果有不明白之处,先咨询细胞库管理员,避免不必要的损失;)
利用全基因组测序(WGS)明确了现有疾病基因组靶向矫正工具的安全可靠性,并创建效率远高于目前基因组靶向编辑技术的新型人类遗传突变修复工具telHDAdV,为开展以干细胞为基础的基因治疗提供了重要的理论依据。
(猫CRFK细胞 来源:通派细胞库 猫肾细胞)
人诱导多能干细胞技术(iPSC)的出现,促进了人类疾病基因组靶向矫正技术的快速发展。目前可用于人类疾病基因组靶向矫正的方法包括:核酶介导的DNA同源重组技术(如ZFN,TALEN及CRISPR/CAS9等)以及不依赖于核酶的大片段DNA同源重组技术(以第三代腺病毒载体HDAdV为代表)。经遗传修复的自体干细胞具有治疗自身疾病的潜力,因此在个体医学和再生医学中具有广阔的应用前景。
(人BXPC-3细胞 来源:通派细胞库 人原位胰腺癌细胞)
利用HDAdV介导的基因组靶向编辑技术在儿童早衰症患者iPSC中实现了对致病基因LMNA的靶向修复,从概念上证实了在病人细胞中原位矫正遗传突变的可行性。
(大鼠BRL细胞 来源:通派细胞库 大鼠肝细胞)
他们继而矫正了帕金森氏症和范可尼贫血症患者干细胞中的致病突变,为这些遗传疾病的机理研究、药物评价及个性化干细胞和基因治疗奠定了基础。
(小鼠EL-4细胞 来源:通派细胞库 小鼠T淋巴瘤细胞)
研究中综合利用HDAdV,TALEN和CRISPR三种不同的方法,对镰刀形细胞贫血症患者iPSC中发生突变的血红蛋白基因(HBB)进行靶向矫正。发现这三种基因矫正方法对于HBB基因具有类似的打靶效率。
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