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细胞:RAEC细胞
中文名称:大鼠主动脉内皮细胞
生长特性:贴壁
RAEC细胞培养基:DMEM-L +10% FBS(GIBCO胎牛血清)
冻存条件:50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO
收到细胞后请尽快更换配套培养基,或自己配置的新鲜培养基(含15%血清),如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时)。
RAEC细胞传代:
1):细胞密度约80%时,吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞(注意根据实际情况,把握消化时间)。
2):镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时;
(可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处,即可肉眼可见细胞层脱落,或吹打后镜下观察吹打处,即消化完成,否则继续消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散。
3):取部分细胞悬液转移到新的培养皿中,添加适当的培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。
4):注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。
(网络信息主针对网络推广作用,仅供参考,细胞培养请咨询细胞库管理员,以细胞库管理员提供给您的信息为准,操作前,如果有不明白之处,先咨询细胞库管理员,避免不必要的损失;)
如何挽救线粒体发生功能障碍细胞;
为了发现可挽救这些细胞的遗传突变,Chen和Birsoy在白头研究所前任研究人员Thijn Brummelkamp开发的一个单倍体遗传系统中,模仿线粒体功能障碍。他们用抗霉素(antimycin)抑制线粒体功能后,发现ATPIF1基因钝化的突变细胞可免于线粒体功能丧失。
(人RD细胞 来源:通派细胞库 人恶性胚胎横纹肌瘤细胞)
atp酶抑制因子ATPIF1,是一个备份系统的一部分,可拯救饥饿的细胞。当细胞丧失氧气和糖分时,平时生产ATP的一个线粒体复合物(称为ATP合成酶),会转变成消耗ATP,这种状态对于一个已经饥饿的细胞可能是有害的。
(人TE671细胞 来源:通派细胞库 人横纹肌瘤细胞)
ATPIF1可与ATP合成酶相互作用,来关闭ATP合成酶,并阻止它消耗线粒体的ATP供应,在这个过程中,线粒体膜电位也变得更坏。
(猴B95-8细胞 来源:通派细胞库 绒猴EBV转化的白细胞)
在这些线粒体功能障碍疾病中,某种意义上,这种状态对于细胞是一种虚假的饥饿状态——其实有充足的养分,但是因为线粒体正常功能被阻断,线粒体就表现的好像没有足够的氧气一样。
(人HC-A细胞 来源:通派细胞库 人软骨细胞)
所以在这些情况下,激活ATPIF1并不好,因为周围还有许多营养可提供ATP。相反,阻断ATPIF1则具有治疗性,因为这能够使膜电位得以维持。
(小鼠F9细胞 来源:通派细胞库 小鼠畸胎瘤细胞)
具有严重线粒体疾病的患者其肝细胞经常受到影响,所以Chen和Birsoy检测了线粒体功能障碍在对照小鼠和ATPIF1敲除小鼠肝细胞中的影响。与具有正常ATPIF1活性的肝细胞相比,具有ATPIF1抑制功能的肝细胞,再次更好地应对了线粒体功能障碍。
(人KP-N-NS细胞 来源:通派细胞库 人肾上腺神经母细胞瘤细胞)
如果你摆脱了ATPIF1,你就会在线粒体功能障碍存在的情况下存活。根据目前为止我们所观察到的结果,在小鼠中阻断ATPIF1并没有严重的副作用。
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