RPMI2650细胞人鼻腔上皮细胞

更新时间：2024-08-12

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细胞：RPMI2650细胞

中文名称：人鼻腔上皮细胞

生长特性：贴壁细胞

RPMI2650细胞培养基：1640 培养基血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

RPMI2650细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

鸡特定基因序列(Chiken)核酸扩增检测：

1．DNA提取(用户可根据需要选择商业化DNA提取试剂盒，如Qiagen DNA提取试剂盒)

1.1动物组织、食品或饲料：直接取约50mg上述材料，置入洁净的1.5ml离心管中，加50μl核酸提取液B 充分混匀（提取液用前需室温溶解并充分混匀）后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液3μl做PCR反应。

1.2血液：取约0.5ml抗凝血转至一洁净的1.5ml EP管中，加1ml 红细胞裂解液(1×RCLB，使用前请按照1:9稀释10×RCLB),剧烈震荡裂解30s，3,000rpm离心5min，弃上清，重复裂解2次，最后加1ml生理盐水洗涤一次，5,000rpm离心3min，弃上清，沉淀加50μl核酸提取液B充分混匀（提取液用前需室温溶解并充分混匀）后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液3μl做PCR反应。

2．PCR扩增

取单管单份Chiken PCR反应管，加入处理后的样品(或阴性质控品、Chiken -阳性质控品)3μl，10,000rpm瞬时离心30s。将各反应管做好标记，置入PCR反应槽内，设置反应体积(30μl)，按照下列条件扩增：

循环条件: 94℃变性2min，后93℃ 30s→58℃ 30s→72℃ 30s ，共35个循环。

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