SK-N-AS细胞培养条件(人脑神经胶质母细胞瘤)

更新时间：2024-08-14

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细胞：SK-N-AS细胞

中文名称：人脑神经胶质母细胞瘤

生长特性：贴壁细胞

SK-N-AS细胞培养基：DMEM-H+20%FBS+1%NEAA（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

SK-N-AS细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

流行性乙型脑炎病毒(JEV)核酸扩增检测

【实验目的】检测人(动物)脑脊液、淋巴结以及血清或病毒细胞培养液等标本中流行性乙型脑炎病毒(日本乙型脑炎病毒-JEV)RNA，适用于(JEV)感染的辅助诊断及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

【实验原理】本试剂盒选取一对流行性乙型脑炎病毒(JEV)特异性引物和一条特异性荧光探针，应用Trizol提取RNA，经逆转录酶作用将RNA转录成cDNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，用PCR-荧光探针体外扩增法对流行性乙型脑炎病毒(JEV)RNA进行体外扩增，从而达到快速检测之目的。

【实验组成】

（RNA提取液B、1管、v500μl/管）（JEV RT MIX、2管、140μl/管）（逆转录酶系、1管、40μl/管）

（Taq酶系、1管、80μl/管）（JEV-PCR MIX、1管、960μl/管）

（JEV阳性质控品、1管、50μl/管(107Copies/ml)）（阴性质控品、1管、500μl/管）

（DEPC水、1管、2000μl/管）备注: RNA提取液A(Trizol Reagents)等另行配备。

【质控标准】

阴性质控品：全部阴性。没有曲线增长。

JEV-阳性质控品：阳性质控品的 Ct 值均应小于 35.0。

∣r∣≥0.97（correlation数值介于-0.97~-1之间，correlation数值等同于∣r∣值）。

以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效，全部试验应重新进行。

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