BT-325细胞 (人脑多型胶质母细胞瘤细胞库)

更新时间：2024-09-09

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细胞：BT-325细胞

中文名称：人脑多型胶质母细胞瘤细胞

生长特性：贴壁细胞

BT-325细胞培养基：1640 培养基血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

BT-325细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

猪脑心肌炎病毒(EMCV)核酸扩增检测（标本采集）：

猪脑、心肌以及淋巴结等组织标本：采集可疑病死猪或扑杀病猪疑似组织约1g左右，置入1.5ml洁净EP管，立即送检。

血清：用一次性无菌注射器抽取受检猪耳静脉或者前腔静脉静脉血2-5ml，静置斜放待血清析出， 1,0000rpm离心3分钟，可取上清立即用于测试；或吸取上部血清(约500µl)转入无菌1.5ml Eppendoff管，立即送检。

适用仪器：主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛细管的仪器，MJ Opticon系列或取得资格认证的定量PCR仪。

质控标准：

阴性质控品：全部阴性。没有荧光值增长。

EMCV-阳性质控品：阳性质控品的 Ct 值均应小于 35.0。

∣r∣≥0.97（correlation数值介于-0.97~-1之间，correlation数值等同于∣r∣值）。

以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效，全部试验应重新进行。

【结果判定】

测定结果的计算：

如果Ct值﹤38，则实验样品的EMCV RNA含量(基因拷贝数/ml)= Qty-Copies/ml；

如果38﹤Ct值﹤40,为灰区建议重新检测，重新检测若38﹤Ct值﹤40判为阳性，否则为阴性。

如果Ct值=40，则EMCVRNA含量（基因拷贝数/ml）﹤1×10P2PCopies/ml (低于检测下限)。