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细胞:A498细胞
中文名称:人肾癌细胞
生长特性:贴壁细胞
培养基:MEM+15%FBS(GIBCO胎牛血清)
冻存条件:50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO
A498细胞常规培养传代流程( 请严格遵照无菌操作)
1. 吸出原培养瓶中的培养基,PBS 缓冲液润洗细胞两次,加 2-3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞(注意把握消化时间,通常控制在 1-2min)
2. 镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散。
3. 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。
4. 注意培养基 PH 值变化情况,定期换液(每周 2-3 次),待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或冻存。
(网络信息主针对网络推广作用,仅供参考,细胞培养请咨询细胞库管理员,以细胞库管理员提供给您的信息为准,操作前,如果有不明白之处,先咨询细胞库管理员,避免不必要的损失;)
真核细胞质和细胞核是功能不同的两个亚细胞部位,细胞核膜是二者分隔的重要屏障,(通派细胞库供应:b.End3细胞株)核膜上分布的核孔复合体(nuclear pore complex, NPC)是沟通细胞核内外物质交流和信息交流的主要通道。
生物大分子经NPC跨核膜转运(nucleocytoplasmic transport )是真核细胞基因复制、(通派细胞库供应:Meth-A细胞株)转录和翻译的必要环节,也是细胞内信号转递、参与细胞核反应(即细胞增殖、分化、凋亡等核反应)调控的重要环节。
一般而言,分子量低于60kD的生物分子可自由通过NPC出入细胞核,(通派细胞库供应:Renca细胞株)而60kD以上的生物大分子通过NPC情形较为复杂,其核质转运是一种耗能的需蛋白介导的主动转运过程,无论是入核(import)转运还是出核(export)转运均需耗能。
该过程由核膜Ran蛋白水解GTP为转运提供能量,(通派细胞库供应:Hek-293细胞株)因此核质侧核膜高RanGTP和胞质侧核膜高RanGDP浓度的不对称性是核质转运的重要基础。
需入核转运的生物大分子通常有参与基因复制、(通派细胞库供应:Hela细胞株)转录的蛋白因子和各种酶系,如复制酶、转录酶、U snRNP、hnRNP蛋白颗粒和细胞核内转录调节因子如Stat3等,以及其他需入核才发挥作用的外源性大分子如基因治疗的外源重组DNA、病毒基因等;
相反,需出核转运的生物大分子包括细胞核内各类RNA(rRNA、mRNA、tRNA)、(通派细胞库供应:Intestine 407细胞株)U snRNP蛋白颗粒、NES蛋白等。
生物大分子正常的出入核转运是真核细胞生长、(通派细胞库供应:SBC-7细胞株)增殖、分化和发育等生命活动的基本保证。
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