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细胞:A875细胞
中文名称:人黑色素瘤细胞
生长特性:贴壁细胞
培养基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
冻存条件:50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO
A875细胞常规培养传代流程( 请严格遵照无菌操作)
1. 吸出原培养瓶中的培养基,PBS 缓冲液润洗细胞两次,加 2-3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞(注意把握消化时间,通常控制在 1-2min)
2. 镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散。
3. 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。
4. 注意培养基 PH 值变化情况,定期换液(每周 2-3 次),待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或冻存。
(网络信息主针对网络推广作用,仅供参考,细胞培养请咨询细胞库管理员,以细胞库管理员提供给您的信息为准,操作前,如果有不明白之处,先咨询细胞库管理员,避免不必要的损失;)
核孔复合体模型及其结构蛋白;
根据高倍电子显微镜对青蛙卵细胞、昆虫细胞、(通派细胞库供应:WRL68细胞株)脊椎动物细胞和酵母细胞等的研究人们提出了核孔复合体的圆柱状模型,该模型认为细胞核膜由内、外两层核膜组成,两核膜之间为核间腔(nuclear lumen);
内外两侧核膜以外分别为核液面和胞质面;(通派细胞库供应:L929细胞株)每个NPC由对称的8分子幅蛋白(spoke)将内、外两层核膜粘在一起且8分子幅蛋白相互围成一疏水孔道;孔中心有一中央插销蛋白(central plug,transporter),中央插销蛋白控制着生物大分子出入NPC的速率或启闭;
幅蛋白与内层核膜融合为一胞质环(cytoplasmic ring),(通派细胞库供应:95d-nc细胞株)胞质环引出八根长30~50nm游离于胞质的胞质纤丝(cytoplasmic filament);同样,幅蛋白与外层核膜融合成一核质环(nuclear ring),核质环上引出八根长100nm提篮纤丝(basket filament)
由一根终末环(terminal ring)将提篮纤丝的另一端连在一起形成提篮样网筐(nuclear basket)结构。
核质环直接与核内核纤层蛋白(nuclear lamina)相连,(通派细胞库供应:Nrk-52e细胞株)终末环与核内纤丝样核网格(nuclear lattice)骨架蛋白相连,形成核内复杂的高级网格骨架基础。
当生物小分子通过NPC进行自由扩散时NPC孔径约9nm,(通派细胞库供应:5-8f-m细胞株)生物大分子进行主动转运时孔径可达25nm,可见NPC结构并不是刚性的。
NPC数目、位置和孔径均处于周期性变化,NPC随机分布于细胞核表面上,不同时期细胞核表面上NPC数目不一样,NPC数量最多时可达107个/核。
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