细胞：Colon26细胞

中文名称：小鼠结肠癌细胞

生长特性：贴壁细胞

培养基：1640 培养基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

细胞常规培养传代流程（ 请严格遵照无菌操作）

1． 吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在 1-2min）

2． 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰_酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。

3． 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4． 注意培养基 PH 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

细胞进行蛋白质生产的质量控制对细胞的生存是非常重要的，在内质网中分子伴侣calnexin/calreticulin循环保证只有正确折叠的糖蛋白才能到达它们的目的地。

而错误折叠的糖蛋白则通过内质网的蛋白质降解途径(ERAD-ER-associated degradation)进行降解。ERAD使蛋白质被逆向定位到细胞质中，再被蛋白酶解体进行降解。

以前发现一个跨膜的缺失甘露糖苷酶活性的alpha类甘露糖苷酶I型蛋白-EDEM(a transmembrane-mannosidase-I-like protein that lacks mannosidase activity)能够加速ERAD的活性。

N链接多糖Glc1Man9GlcNAc2的糖蛋白能够与calnexin或calreticulin进行结合，由这两个分子伴侣来促进它们的折叠，如果加入葡萄糖则能够干扰这个过程。

但当折叠没有完_全的时候，游离的糖蛋白或者由糖基转移酶继续糖基化然后由分子伴侣促进折叠，或者被内质网的alpha甘露糖苷酶I作用产生Man8GlcNAc2而将糖蛋白导向ERAD的降解途径。

Nagata and colleagues在第一篇文章中发现EDEM与跨膜的分子伴侣calnexin作用，而不与可溶性的分子伴侣calreticulin，而且calnexin的跨膜区对它们的相互作用是必需的。

研究者用ERAD途径降解的底物之一NHK(an α1-antitrypsin variant)分析发现，EDEM和NHK与calnexin的结合和底物从calnexin上的释放对于EDEM介导的ERAD途径是必需的。而且EDEM可以通过促进底物从calnexin的释放来加速ERAD途径。

发现过表达EDEM的水平不仅仅加速了膜结合的ERAD底物降解，也加速了可溶性的ERAD底物降解。而且当细胞内的EDEM水平降低时ERAD底物降解被减慢了。

他们的工作对于EDEM在内质网蛋白合成过程中的质量控制机制有了初步的探讨。