体细胞胚诱导 1. 实验材料: 胡萝卜种子。 2. 培养基 2.1 胚性愈伤组织诱导培养基 MS无机盐附加：烟酸0.05mgL-1、VB6和VB1各0.01mgL-1、甘氨酸3mgL-1、肌醇100mgL-1、激动素0.2mgL-1、2,4—D 0.1mgL-1、蔗糖20gL-1、琼脂2－5gL-1，pH5.8。 2.2 体细胞胚形成培养基 MS无机盐附加：烟酸0.05mgL-1、VB6和VB1各0.01mgL-1、甘氨酸3mgL-1、肌醇100mgL-1、激动素0.2mgL-1、蔗糖20gL-1，pH5.8。 3. 实验过程 a. 烟草种子以10％次氯酸钙溶液表面消毒15min，用无菌蒸馏水洗3次，置于培养皿内无菌的湿润滤纸上，在25℃下于暗处萌发； b. 取7日龄幼苗切取下胚轴部位长1cm，单个地置于胚性愈伤组织诱导培养基上，接种好的材料置于25℃温度下黑暗培养4-6周； c. 将愈伤组织小块转移到与原来成分相同的新鲜培养基上，一半置于于25℃下照光培养，另一半继续在黑暗条件下培养，若以类似方式每4周继代1次，可对组织进行繁殖； d. 诱导体细胞胚胎发生：将在光照下继代培养的愈伤组织块转移到不含2,4—D的培养基中培养，3~4周后，将出现大量的各处在不同的发育阶段的体细胞胚。 e. 观察体细胞胚的发育过程，统计每个愈伤组织形成的体细胞胚数，统计不同发育时期的体细胞胚占胚总数的比例，分析培养中体细胞胚形成的时间、控制其一致性可能采取得调控措施。 |
