ATCC细胞 氨基酸的分离鉴定 一、目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 二、原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。 层析溶剂由有机溶剂和水组成。 物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf 值（比移）来表示的： R=原点到层析点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离 在一定的条件下某种物质的Rf 值是常数。Rf 值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。 ATCC细胞 氨基酸的分离鉴定三、器材 1、层析缸① 2、毛细管3、喷雾器4、培养皿 5、层析滤纸（新华一号） 四、试剂 1、扩展剂 是4 份水饱和的正丁醇和1 份醋酸的混合物。将20mL 正丁醇和5mL 冰醋酸放入分液漏斗中，与15mL 水混合，充分振荡，静置后分层，放出下层水层。取漏斗内的扩展剂约5mL 置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的倒入培养皿中备用. 2、氨基酸溶液0.5%的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液（各组份浓度均为0.5%）。各5mL 3、显色剂50~100mL 0.1%水合茚三铜正丁醇容液。 ATCC细胞 氨基酸的分离鉴定五、操作 1、将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。 2、取层析滤纸（长22cm、宽14cm）一张。在纸的一端距边缘2~3cm处用铅笔划一条直线，在此直线上第间隔2cm 作一记号如右图。 3、点样用毛细管将各种氨基酸样品分别点在这6 个位置上，干后再点一次。每点在纸上扩散的直径zui大不超过3mm。 4、扩展用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将盛有约20mL扩展剂的培养皿建迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中（点样的一端在下，扩展剂的液面需你于点样线1cm）。待溶剂上升15~20cm 时即取出滤纸，自然干燥或用吹风机热风吹干。 5、显色用喷雾器均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5 分钟（100℃）或用热风吹干即可显出各层析斑点。 6、计算各种氨基酸的Rf 值。 |
