细胞：HUAEC细胞 中文名称：人脐带动脉内皮细胞 生长特性：贴壁细胞 培养基：DMEM-H +10%FBS 冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO 细胞常规培养传代流程（ 请严格遵照无菌操作） 1． 吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在 1-2min） 2． 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰_酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。 3． 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。 4． 注意培养基 PH 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或冻存。 （网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；） 
由于质粒可以复制扩增，相比起化学合成来说，这就能够显著降低制备siRNA的成本。因为质粒的价钱大约是3000多人民币，还不到化学合成1条21nt的RNA价格的一半，但是就可以自行制备siRNA而不受数量的限制。 （人MDA-MB-415细胞 乳癌细胞）（人MDA-MB-435细胞 乳导管癌细胞） 在这里为大家介绍几种不同的siRNA合成质粒，但是大家要注意的是这里介绍的siRNA质粒是不同于体外转录合成RNA的质粒，因为这里制备的是用于哺乳动物细胞实验的siRNA，而不是长链的RNA（长链的dsRNA不适宜用在哺乳动物细胞; （人MDA-MB-436细胞 乳癌细胞）（人NCI-H1703细胞肺鳞癌细胞） 因为会引发非特异抑制pSilencer siRNA 表达载体系列是用于在培养的哺乳动物细胞中表达siRNA的一系列载体。 （人NCI-H2170细胞肺鳞癌细胞）（人NCI-H460细胞肺癌细胞） 在载体上包含有RNA聚和酶III （Pol III）启动子，氨苄抗性基因和大肠杆菌复制子，只要将编码一小段对应目的基因特异序列的、其RNA能形成发夹结构（就是回文结构）的DNA序列插入载体中Pol III 启动子的下游，转入哺乳动物细胞，载体就能表达出发夹结构的RNA，这种RNA很快在细胞中加工成为siRNA。 （人NCI-H524细胞肺癌细胞）（人NCI-H661细胞肺癌细胞） 这些表达载体已经成功的在Hela细胞中抑制了包括Cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在内的多个基因的表达。实验表明：能够被化学合成或者体外合成的siRNAs抑制的基因同样可以被表达相同序列的载体生成的siRNAs抑制。 （人NCI-H69细胞肺癌细胞）（人NCI-H716细胞结直肠腺癌细胞）
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