ATCC 小鼠骨髓细胞染色 1.实验原理小鼠骨髓细胞有高度的分裂活性，并且数量非常多，因此不必进行体外培养，可直接观察到分裂期细胞。处于分裂期的细胞经秋水仙素处理，阻断纺锤丝的形成，使细胞分裂停止于中期，此时染色体达到zui大收缩，具有典型的形态。低渗处理使细胞破裂，便于染色体分散。该方法在临床上多用于白血病的研究，也可用于观察毒性物质对机体遗传物质——染色体损伤的状况。 小鼠染色体2n=40,均为端着丝粒染色体,雄性为40，XY，雌性为40，XX。 ATCC 小鼠骨髓细胞染色 2.实验试剂与器材显微镜、恒温水浴锅、低速离心机、电子天平、解剖器械（搪瓷解剖盘、剪刀、镊子），注射器、针头、试管、试管架、滴管、载玻片。 0.85％生理盐水、固定液（甲醇∶冰醋酸为3∶1）、PBS（pH6.8）、Giemsa染液、秋水仙素（以100μg/ml的浓度溶于0.85％生理盐水中）、0.075mol/LKCl。 ATCC 小鼠骨髓细胞染色 通派细胞库 现货供应细胞如下： 呼吸系统 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383 大鼠气管上皮细胞RTE 大鼠肺成纤维样细胞RL1 大鼠肺细胞WTRL1 循环系统 大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7r5 大鼠心肌细胞H9c2（2-1） 消化系统 大鼠肝细胞瘤H-4-Ⅱ-E 大鼠肝细胞IAR20 大鼠肝细胞瘤H4-Ⅱ-E-C3 大鼠肝细胞BRL 大鼠肝细胞BRL 3A 大鼠肝癌细胞RH-35 泌尿系统 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC-12 正常大鼠肾细胞NRK 大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1 大鼠肾细胞RK1 大鼠肾细胞NRK-52E 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（低分化）PC-12 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（高分化）PC-12 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（未分化）PC-12 脑和神经系统 大鼠垂体瘤细胞GH3 大鼠脑胶质瘤细胞C6 大鼠雪旺细胞RSC96 骨、关节、肌肉、皮肤系统 大鼠骨髓瘤细胞Y3-Ag1.2.3 大鼠纤维母细胞1/EJ 1-1 大鼠皮肤成纤维样细胞RS1 大鼠肌肉成纤维样细胞RM1 大鼠骨髓瘤细胞IR983F 大鼠成肌细胞L6 大鼠骨肉瘤细胞UMR-106 内分泌系统 大鼠乳腺腺癌细胞MADB106 大鼠胰岛细胞瘤细胞INS-1 大鼠胰岛β细胞瘤细胞RIN-m5F 大鼠胰腺外分泌细胞AR42J 大鼠乳腺癌细胞SHZ-88 生殖系统 眼、耳、鼻、喉、口腔系统 血液、淋巴系统 大鼠腹水癌细胞Walker/LLC-WRC 256 大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞RBL-1 3.实验方法与步骤 （1）秋水仙素处理：取骨髓前3h先给小鼠腹腔注入秋水仙素，注射剂量为100μg／kg动物体重。 （2）取骨髓：用损伤脊髓法处死小鼠，然后用剪刀剪开大腿上的皮肤和肌肉，取出大腿骨，用一小块纱布搓干净附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨两端膨大的关节头，然后用注射器吸取5ml0.85％生理盐水，插入股骨一端，将骨髓细胞冲洗至10ml的离心管中。可重复冲洗多次，直至骨髓腔呈白色为止。 （3）低渗处理：将所获得的细胞悬浮液以1000rpm离心10min，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加0.075mol/LKCL溶液（37℃）至8ml刻度，将细胞沉淀物吹散打匀，在37℃水浴低渗25min。 （4）固定：低渗处理后，立即加入1ml新配制且预冷的固定液，抽打均匀，然后1000rpm离心10min，弃上清。沿管壁加固定液至6ml，吹散细胞后静止固定10min，即*次固定。按上述条件离心，去上清液，再次加入固定液至6ml，进行第二次固定。10min后离心吸去上清液，留0.2ml沉淀物，再往沉淀物中滴加4滴固定液，冲匀制成细胞悬液。 （5）滴片：取事先在冰箱中预冷的载玻片，从约15cm高处向每个载玻片上滴1～2滴细胞悬液于粘有冰水的载玻片上，晾干。 （6）染色：取制片平放在玻璃板上，用1∶9Giemsa染液染色20min，流水冲洗后晾干。 （7）观察：小白鼠染色体的形态特征，并计算2n的染色体数目。 |
