酵母细胞的培养
一、实验目的
1．掌握酵母细胞的培养方法
2．学会使用相差和微分干涉显微镜
二、异源互补技术概述
酿酒（芽殖）酵母的培养在许多方面可以与大肠杆菌相比较。这种酵母可以用标准的微生物学技术在液体和固体培养基中进行培养。大多数酵母菌株在复合液体培养基中的倍增时间为90～120min，到静止期时细胞滴度为3×108到5×108细胞/mL。单个细胞在复合固体培养基上经过36 hr可长成1～2mm的单菌落，在合成的有限培养基中生长较慢，倍增时间至少增加为原来的两倍，且细胞的zui终滴度仅达到2×107到3×107细胞/mL。在有限培养基平板上菌落需大约60 hr才能长成容易计数的大小。在复合或有限培养基上生长的菌落能影印培养或转移到膜上，进行分子水平的分析。
非洲粟酒裂殖酵母和其近亲酿酒酵母一样，是一种子囊真菌，但它与发芽酵母的关系并不密切，两种酵母的蛋白质序列和基因同源性在60﹪到90﹪。与酿酒酵母相比，非洲粟酒裂殖酵母通常是单倍体细胞，可分为两种交配型，在饥饿情况下不同的交配型单倍体进行交配，形成杂合的双倍体合子。双倍体合子经过减数分裂形成4个孢子，由孢子发芽而长成单倍体菌落。非洲粟酒裂殖酵母具有典型的真核生物的细胞周期，包括G1、S、G2和M 四个时期。在基本或复合培养基中其世代时间为2到4个h，其中G2期占细胞周期的70﹪，其它期各占10﹪。 三、材料、试剂和仪器
1． 材料
酿酒芽殖酵母（Saccharomyces cerevisiae）和非洲粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces kephir）。 2． 试剂 人红细胞刺激因子（ESF）ELISA 试剂盒
人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子（TRANCE）ELISA 试剂盒
人生长激素释放因子（GH-RF）ELISA试剂盒
人巨噬细胞趋化因子（MCF）ELISA 试剂盒
人α/β干扰素受体（IFN-α/βR）ELISA 试剂盒
人B细胞生长因子（BCGF）ELISA 试剂盒
人B细胞分化因子（BCDF）ELISA 试剂盒
人上皮细胞粘附分子（Ep-CAM/CD362）ELISA 试剂盒
人可溶性粘附分子（Sam）ELISA 试剂盒
人巨噬细胞替代激活相关化学因子1（AmAC-1）ELISA 试剂盒
人可溶性血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2/sFLK-1）ELISA 试剂盒
人胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）ELISA 试剂盒
人穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）ELISA试剂盒
人多效生长因子（PTN）ELISA试剂盒
人可溶性CD28（sCD28）ELISA试剂盒
人淋巴细胞因子ELISA 试剂盒
人胸腺活化调节趋化因子（TARC/CCL17）ELISA 试剂盒
人神经细胞粘附分子配体1（NCAM-L1/CD171）ELISA试剂盒
人神经保护因子（CVNPF）ELISA 试剂盒
人可溶性肿瘤坏死因子α受体（sTNFαR）ELISA试剂盒
人可溶性细胞因子受体（sCKR）ELISA试剂盒
人可溶性凋亡相关因子配体（sFASL）ELISA 试剂盒
人细胞凋亡抑制因子（IAP）ELISA 试剂盒
人集落刺激因子（CSF）ELISA 试剂盒
人γ干扰素诱导单核细胞因子（MIGF/CXCL9）ELISA 试剂盒
人干扰素诱导T细胞趋化因子（ITAC/CXCL11）ELISA 试剂盒
人CD14分子（CDl4）ELISA 试剂盒
人凋亡诱导因子（AIF）ELISA 试剂盒 1）酿酒芽殖酵母的培养基
（1）YPD（YPED）液体培养基（用于酵母菌摇培，100mL）
细菌培养用蛋白胨（Bacto-peptone） 2g
细菌培养用酵母提取物 （Bacto-Yeast extract） 1g
葡萄糖（Glucose，配成40%detrose贮液单独灭菌,4℃保存） 2g
加ddH2O至90mL，调pH值至4-5，定容至95mL，高温灭菌（121℃,15min）。待温度降至55℃时，加入5mL预热（至少室温放置30min）无菌的40％detrose贮液。 （2）YPD（YPED）固体培养基（可用于保菌或培养，100mL）
在YPD液体培养基的营养物中加入2g琼脂粉，加ddH2O至90mL，调pH值至5.8，定容至95mL，高温灭菌（121℃, 15min）。待温度降至55℃时，加入5mL预热（至少室温放置30min）无菌的40％ detrose贮液。 （3）YPAD（斜面）培养基（可用于保菌或培养营养缺陷菌株，100mL）
在YPD液体培养基中加入硫酸腺嘌呤（Adenine hemisulfate salt，腺嘌呤半硫酸盐）40mg，琼脂（Bacto-agar）（液体培养基不加）2g。加ddH2O至90mL，调pH值至5.8（液体调至4左右），定容至95mL，高温灭菌（121℃,15min）。待温度降至55℃时，加入5mL预热（至少室温放置30min）无菌的40％detrose贮液。分装培养基，倾斜放置形成斜面，每支试管依大小可加入3-5mL培养基。（若葡萄糖直接加入培养基则可先分装至试管后灭菌（需要棉塞），灭菌会造成葡萄糖碳化，培养基略变褐色，对酵母培养会略有影响）。该培养基用于4-6个月的短暂保菌或酵母培养。
人白细胞共同抗原（LCA/CD45）ELISA 试剂盒
人CD4分子（CD4）ELISA 试剂盒
人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白（P-cad）ELISA 试剂盒
人角化细胞生长因子（KGF）ELISA 试剂盒
人血小板衍生生长因子BB（PDGF-BB）ELISA试剂盒
人CXC趋化因子配体16（CXCL16）ELISA 试剂盒
人CXC趋化因子受体3（CXCR3）ELISA 试剂盒
人γ干扰素诱导蛋白16/p16（IFI16/p16）ELISA 试剂盒
人基质细胞衍生因子1a（SDF-1a/CXCL12）ELISA 试剂盒
人淋巴细胞趋化因子（Lptn/LTN/XCL1）ELISA 试剂盒
人α干扰素（IFN-α）ELISA试剂盒
人可溶性CD86（B7-2/sCD86）ELISA 试剂盒
人白介素27（IL-27）ELISA试剂盒
人白介素23（IL-23）ELISA试剂盒
人巨噬细胞移动抑制因子（MIF）ELISA试剂盒
人组织因子途径抑制物（TFPI）ELISA 试剂盒
人干扰素诱导蛋白10（IP-10/CXCL10）ELISA 试剂盒
人白介素1（IL-1）ELISA 试剂盒
人白介素17（IL-17）ELISA 试剂盒
人白介素1β （IL-1β）ELISA 试剂盒
人表皮生长因子（EGF）ELISA 试剂盒
人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）ELISA试剂盒
人巨噬细胞炎性蛋白5（MIP-5）ELISA试剂盒
人可溶性E选择素（sE-selectin）ELISA 试剂盒
人可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）ELISA试剂盒
人细胞间粘附分子2（ICAM-2/CD102）ELISA 试剂盒
2）非洲粟酒裂殖酵母的培养基
（1）YE培养基（100mL）
酵母提取物 0.5g
葡萄糖（Glucose，配成40%detrose贮液单独灭菌，4℃保存） 2g
细菌培养用琼脂（Bacto-agar） 2g
加ddH2O至90mL，调pH值至5-6，定容至95mL，高温灭菌（121℃,15min）。待温度降至55℃时，加入5mL预热（至少室温放置30min）无菌的40％detrose贮液。 |
