人肺细胞HLF-a细胞 细胞文章

【实验目的】
学习凯氏定氮法的原理和操作技术。
【实验原理】
    凯氏定氮法用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时，则可用此法测定样品中蛋白质的含量。
    当蛋白质与浓硫酸共热时，其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程通常称为“消化"。但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。
消化完成后，在凯氏定氮仪中加入浓碱，可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借助水蒸汽蒸馏法，将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中氢离子结合，使溶液中的氢离子浓度降低，指示剂颜色改变，然后用标准无机盐酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。根据所用标准盐酸的量可计算出待测物中的总氮量。
蛋白质的含氮量为16%，即1克蛋白质中的氮相当于6.25克蛋白质，用凯氏定氮法测出的含氮量乘以6.25,即得样品中蛋白质的含量。
【实验材料】

人肺细胞HLF-a细胞 细胞文章
人胚肺成纤维细胞MRC-5  
人胚肺成纤维细胞CCC-HPF-1  
人胚胎气管组织来源细胞CCC-HBE-2  
人胚胎肺成纤维细胞WI-38  
SV-40Z转化肺成纤维细胞WI38/VA13  
人胚肺二倍体细胞2BS  
人胚肺二倍体细胞KMB-17  
人肺细胞HLF-a  
人小细胞肺癌细胞DMS 153  
人胚肺细胞 VA13细胞WI-38 VA13亚系 2RA  
人胚肺二倍体细胞HEL-1  
人胚肺细胞系KuMA  
人肺转化细胞系AE1201    
人肺鳞癌细胞NCI-H226  
人胚肺二倍体细胞HEL-2  
人支气管上皮样细胞BEAS-2B  
人胚肺转化细胞SL-1  
人肺腺癌细胞Calu-3  
人小细胞肺癌细胞NCI-H209  
人低分化肺腺癌细胞GLC-82  
人小细胞肺癌细胞NCI-H446  
人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H157  
人肺鳞癌细胞NCI-H520  
人肺巨细胞癌高转移细胞株PG-BE1  

人肺细胞HLF-a细胞 细胞文章
人肺巨细胞癌低转移细胞株PG-LH7  
人肺癌细胞A-427  
人低分化肺腺癌细胞SK-LU-1  
人肺支气管癌细胞NCI-H1650  
人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H1975  
人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H2087  
人小细胞肺癌细胞NCI-H2227  
人非小细胞肺癌细胞NCI-H23  
人肺腺鳞癌细胞NCI-H596  
人非小细胞肺癌细胞NCI-H838  
人肺鳞癌细胞LTEP-s  

1.实验器材
微量凯氏定氮仪  1套；50ml凯氏烧瓶  4个；移液管；锥形瓶；试管；小玻璃珠
2.试验试剂
(1) 浓硫酸；30％氢氧化钠溶液；2％硼酸溶液；标准盐酸溶液(0.01mol／L)。
(2) 粉末硫酸钾—硫酸铜混合物 ：K2SO4与CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。
(3)混合指示剂(田氏指示剂)：由50ml 0.1％甲烯蓝乙醇溶液与200ml 0.1％甲基红乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶中备用。
(4) 样品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作为样品。
【实验操作】
1.安装凯氏定氮仪。
2.消化：取4个50ml凯氏烧瓶并标号,各加1颗玻璃珠，在1号及2号瓶中各加样品1ml，催化剂(K2SO4- CuSO4·5H2O)200 mg，浓硫酸5 ml。注意加样品时应直接送入瓶底，而不要沾在瓶口和瓶颈上。在3号及4号瓶中各加1 ml蒸馏水和与1、2号瓶相同量的催化剂和浓硫酸，作为对照。在通风橱内进行消化。
    在消化开始时应控制火力，不要使液体冲到瓶颈。待硫酸开始分解并放出SO2白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明淡绿色为止。撤掉火力，冷却至室温。