成纤维细胞 培养细胞观察 细胞接种或传代以后,实验者每天或至多间隔1~2d,要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化,做换液或传代处理,如发现异常情况应及时采取措施。 1. 细胞形态 生长状态良好的细胞,在一般显微镜下观察时可见,细胞透明度大、折光性强、轮廓不清。细胞生长不良时,轮廓增强,胞质中常出现空泡、脂滴和其他颗粒状物,细胞之间空隙加大,细胞形态可变得不规则甚至失去原有特点,如上皮细胞变成类上皮细胞等。某些染料当细胞死亡时能透过变性的胞膜与解体的细胞核DNA结合,而令其着色。因而常用台盼蓝(trypan blue) 鉴别细胞死活,活细胞不着色,死细胞核呈蓝色。通派(上海)细胞库:www.shtpbio.com 2. 细胞生长 初代培养或传代的细胞悬液接种以后,经过长短不同的潜伏期后开始增殖。传代细胞系、胚胎组织或幼体组织一般在第二天即可见细胞生长,一周内便可连接成片。接种细胞长满瓶壁后,应及时做再培养。否则由于营养物消耗和代谢积累,细胞即进入停止期或退化期。此时细胞轮廓增强,细胞内常出现颗粒状堆积物,为膨胀的线粒体,细胞质呈空泡化,细胞变圆、粗糙,严重时细胞从瓶壁脱落,只有及时再做传代处理,才能使细胞继续生长繁殖。 3. 营养液 正常情况下,培养液呈桃红色。如果细胞维持在pH6.5~6.6条件下,细胞会脱落死亡。当培养液酸化变黄时,说明培养液中代谢产物已堆积到一定量,需要更换新鲜培养液。培养液中如加Hepes或用5%CO2温箱培养可使pH维持相对稳定。更换营养液的时间,可依营养物的消耗而定,细胞生长旺盛时2~3d换一次,生长缓慢时,3~4d亦可。要特别注意各种细胞对pH值要求是不一样的。 4. 微生物污染 微生物污染培养细胞培养物后会出现pH值改变,培养液呈现混浊状。细菌感染后,由于细菌的运动,光镜观察可见有微闪光;真菌感染则在镜下见许多细丝状菌丝,有时还密集有群集孢子;支原体的污染需要借助一些检测手段才可检出。细胞污染以后一般应当废弃,对于重要的细胞株,可以参考相关专著,介绍采取一些措施清除污染。比较重要的实验、珍贵的细胞,至少由两个实验人员独立培养操作,或由一个人分次(不同时)操作。除培养实验室的卫生条件外,空气中的湿度与微生物污染关系密切。重要的、周期长的实验尽量安排在空气湿度低的秋冬季进行。 成纤维细胞 培养细胞观察 人胚肺成纤维细胞MRC-5 细胞株 来源 人胚肺成纤维细胞CCC-HPF-1 细胞株 来源 人胚胎气管组织来源细胞CCC-HBE-2 细胞株 来源 人胚胎肺成纤维细胞WI-38 细胞株 来源 SV-40Z转化肺成纤维细胞WI38/VA13 细胞株 来源 人胚肺二倍体细胞2BS 细胞株 来源 人胚肺二倍体细胞KMB-17 细胞株 来源 人肺细胞HLF-a 细胞株 来源 人小细胞肺癌细胞DMS 153 细胞株 来源 人胚肺细胞 VA13细胞WI-38 VA13亚系 2RA 细胞株 来源 人胚肺二倍体细胞HEL-1 细胞株 来源 人胚肺细胞系KuMA 细胞株 来源 人肺转化细胞系AE1201 细胞株 来源 人肺鳞癌细胞NCI-H226 细胞株 来源 人胚肺二倍体细胞HEL-2 细胞株 来源 人支气管上皮样细胞BEAS-2B 细胞株 来源 人胚肺转化细胞SL-1 细胞株 来源 人肺腺癌细胞Calu-3 细胞株 来源 成纤维细胞 培养细胞观察 体内细胞培养及其操作步骤 1. 瘤细胞悬液接种 (1)无菌选取生长良好(有光泽,淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞。 (2)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨,经80~100目筛网过滤成细胞悬液。 (3)培养细胞应用PBS洗两遍。 (4)计数并调整细胞浓度至107~108/ml。 (5)常规消毒后,于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(0.1ml/部位,>106细胞)。初次接种成功率低,细胞数尽可能多一些。 (6)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期,以后随着传代潜伏期逐渐缩短,zui后固定为一个相对稳定的时间。 2. 腹水瘤的建立与腹水瘤的接种 将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位,引起腹水,腹水中含有瘤细胞,将这种腹水反复传代,即可成为腹水瘤。初次传代时,腹水常呈血性(含大量红细胞),反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。 (1)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤,进行细胞计数。 (2)消毒动物,左下腹穿刺接种106腹水瘤细胞。 (3)接种腹水瘤细胞后约7~12d,待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,用9号针头抽取腹水,也可行腹部解剖后,用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。 (4)抽取的腹水经3000rpm离心15min,收集上清,分装冻存备用。 人小细胞肺癌细胞NCI-H209 细胞株 来源 人低分化肺腺癌细胞GLC-82 细胞株 来源 人小细胞肺癌细胞NCI-H446 细胞株 来源 人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H157 细胞株 来源 人肺鳞癌细胞NCI-H520 细胞株 来源 人肺巨细胞癌高转移细胞株PG-BE1 细胞株 来源 人肺巨细胞癌低转移细胞株PG-LH7 细胞株 来源 人肺癌细胞A-427 细胞株 来源 人低分化肺腺癌细胞SK-LU-1 细胞株 来源 人肺支气管癌细胞NCI-H1650 细胞株 来源 人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H1975 细胞株 来源 人非小细胞肺腺癌细胞NCI-H2087 细胞株 来源 人小细胞肺癌细胞NCI-H2227 细胞株 来源 人非小细胞肺癌细胞NCI-H23 细胞株 来源 人肺腺鳞癌细胞NCI-H596 细胞株 来源 人非小细胞肺癌细胞NCI-H838 细胞株 来源 人肺鳞癌细胞LTEP-s 细胞株 来源
人原钙黏素1(PCDH1)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人白介素2受体(IL-2R)ELISA 试剂盒 免费待 96T * 人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人胸肾表达趋化因子(BRAK/CXCL14)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人B-淋巴细胞趋化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA 试剂盒 免费待测96T* 人结缔组织活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人免疫球蛋白A Fc段受体Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA 试剂盒 免费待测 96T* 人免疫球蛋白E Fc段受体Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA 试剂盒 免费待测96T * 人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA 试剂盒 免费待测96T* 人粒细胞趋化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人ω干扰素(IFN-ω)ELISA 试剂盒 免费待测 96T* 人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA试剂盒 免费待测 96T* 人干扰素调节因子(IRF)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人淋巴毒素β(LTB)ELISA 试剂盒 免费待测 96T* 人淋巴毒素α(LTA)ELISA 试剂盒 免费待测 96T* 人CC趋化因子受体1(CCR1)ELISA试剂盒 免费待测 96T * 人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA试剂盒 免费待测 96T * 人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA 试剂盒 免费待测 96T* 人可溶性CD38(sCD38)ELISA 试剂盒 免费待测 96T * 人可溶性CD21(CR2/sCD21)ELISA 试剂盒 免费待测 96T* 人可溶性瘦素受体(sLR)ELISA试剂盒 免费待测 96T * 人Toll样受体9(TLR-9/CD289)ELISA试剂盒 免费待测 96T* 人转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA 试剂盒 免费待测96T *
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