人羊膜细胞HA细胞 细胞来源 【实验目的】 学习凯氏定氮法的原理和操作技术。 【实验原理】 凯氏定氮法用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时,则可用此法测定样品中蛋白质的含量。 当蛋白质与浓硫酸共热时,其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水,而氮则转变成氨,并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程通常称为“消化”。但是,这个反应进行得比较缓慢,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,以促进反应的进行。 消化完成后,在凯氏定氮仪中加入浓碱,可使消化液中的硫酸铵分解,游离出氨,借助水蒸汽蒸馏法,将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后,氨与溶液中氢离子结合,使溶液中的氢离子浓度降低,指示剂颜色改变,然后用标准无机盐酸滴定,直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。根据所用标准盐酸的量可计算出待测物中的总氮量。 蛋白质的含氮量为16%,即1克蛋白质中的氮相当于6.25克蛋白质,用凯氏定氮法测出的含氮量乘以6.25,即得样品中蛋白质的含量。 【实验材料】
人羊膜细胞HA细胞 细胞来源: 人胎儿胸腺细胞株HFT-8810 人前列腺上皮细胞RWPE-1 人前列腺正常细胞RWPE-2 人男性正常龟头细胞Hs68 人整合 SV40基因的乳腺上皮细胞HBL-100 人前列腺癌细胞DU 145 人乳腺癌细胞MDA-MB-231 人前列腺癌细胞LNCaP 人乳腺癌细胞MCF 7B 人乳腺癌细胞MDA-MB-157 人乳腺导管癌细胞ZR-75-1 人乳腺导管瘤细胞UACC812 人前列腺癌高转移细胞株PC-3M-IE8 人前列腺癌低转移细胞株PC-3M-2B4 人乳腺导管癌细胞HCC38 人乳腺导管癌细胞ZR-75-30 人乳腺癌瘤株MCF7 人乳腺癌细胞BT-20 人乳腺导管癌细胞BT-549 人乳腺导管癌细胞MDA-MB-175Ⅶ 人乳腺癌细胞MDA-MB-415 人乳腺导管癌细胞MDA-MB-435 人乳腺癌细胞MDA-MB-436 人乳腺癌细胞Bcap-37 人前列腺癌细胞LNCaP clone FGC 人乳腺癌细胞MDA-MB-453 人乳腺癌细胞MDA-MB-435S 人乳腺癌细胞SK-BR-3 人髓状甲状腺肿瘤细胞TT 人乳腺导管癌细胞T47D 人乳腺癌细胞BT-549 人前列腺癌细胞22Rv1 人乳腺癌细胞MDA-MB-468 人甲状腺鳞癌细胞SW579 人乳腺癌细胞Hs 578T 人乳腺癌细胞MDA-MB-468-06 人乳腺导管瘤细胞BT-474 人乳腺癌细胞HCC1937 人前列腺癌细胞PC-3 人乳腺癌细胞ZR-75-30 人乳腺癌细胞MCF7 人乳腺癌细胞BC-009 人乳腺癌细胞BC-019 人乳腺癌细胞BC-020 人乳腺癌细胞BC-021 人乳腺癌细胞BC-022 1.实验器材 微量凯氏定氮仪 1套;50ml凯氏烧瓶 4个;移液管;锥形瓶;试管;小玻璃珠 2.试验试剂 (1) 浓硫酸;30%氢氧化钠溶液;2%硼酸溶液;标准盐酸溶液(0.01mol/L)。 (2) 粉末硫酸钾—硫酸铜混合物 :K2SO4与CuSO4·5H2O以3:1配比研磨混合。 (3)混合指示剂(田氏指示剂):由50ml 0.1%甲烯蓝乙醇溶液与200ml 0.1%甲基红乙醇溶液混合配成,贮于棕色瓶中备用。 (4) 样品溶液:配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作为样品。 【实验操作】 1.安装凯氏定氮仪。 2.消化:取4个50ml凯氏烧瓶并标号,各加1颗玻璃珠,在1号及2号瓶中各加样品1ml,催化剂(K2SO4- CuSO4·5H2O)200 mg,浓硫酸5 ml。注意加样品时应直接送入瓶底,而不要沾在瓶口和瓶颈上。在3号及4号瓶中各加1 ml蒸馏水和与1、2号瓶相同量的催化剂和浓硫酸,作为对照。在通风橱内进行消化。 在消化开始时应控制火力,不要使液体冲到瓶颈。待硫酸开始分解并放出SO2白烟后,适当加强火力,继续消化,直至消化液呈透明淡绿色为止。撤掉火力,冷却至室温。 |