人肺腺癌细胞Calu-3细胞株来源

一、实验原理
在以微生物为材料的遗传学研究中，用某些物理因素或化学因素处理细菌，使基因发生突变，丧失合成某一物质（如氨基酸、维生素、核苷酸等）的能力，因而它们不能在基本培养基上生长，必须补充某些物质才能生长。这样从野生型经诱变筛选得到的菌株，称为营养缺陷型。筛选营养缺陷型菌株必须经过以下几个步骤：诱变处理、淘汰野生型、检出缺陷型、鉴定缺陷型。由于本实验是以大肠杆菌为材料，所以根据细菌的特性分别说明筛选的步骤。
诱变剂的作用主要是提高突变频率，它分为物理和化学的二类。物理诱变剂常用的有X射线、紫外线、快中子、γ射线等诱变处理首先是选择诱变剂，微生物诱变中zui常用的物理诱变剂是紫外线。
诱变剂所处理的微生物，一般要求呈单核的单细胞或单孢子的悬浮液，分布均匀，这样可以避免出现不纯的菌落。用于诱变处理的微生物一般处于对数生长期，那时的细菌对诱变剂的反应zui灵敏。
诱变处理必须选择合适的剂量，剂量的表示有二种，剂量和相对剂量。剂量的单位以尔格/cm2表示，一般用相对剂量。相对剂量与三个因素有关，这三个因素是：诱变源和处理微生物的距离，诱变源（紫外灯）的功率，以及处理的时间。前二个因素是固定的，所以通过处理时间控制诱变剂量。各种微生物的处理zui适剂量是不同的，须经预备实验确定。
经处理以后的细菌，缺陷型还是相当少的，必须设法淘汰野生型细胞，提高营养缺陷型细胞所占比例，以达到浓缩缺陷型的目的。细菌中常用的浓缩法是青霉素法。青霉素是杀菌剂，它只杀死生长的细胞，对不生长的细胞没有致死作用。所以在含有青霉素的基本培养基中野生型能长而被杀死，缺陷型不能长被保存得以浓缩。
检出缺陷型的方法有逐个测定法、夹层培养法、*补给法、影印培养法。这里主要以逐个测定法为例进行说明。把经过浓缩的缺陷型菌液接种在*培养基上，待长出菌落后将每一菌落分别接种在基本培养基和*培养基上。凡是在基本培养基上不能生长而在*培养基上能长的菌落就是营养缺陷型。
经初步确定为营养缺陷型的菌用生长谱法鉴定。在同一培养皿上测定一个缺陷型对多种化合物的需要情况。

人肺腺癌细胞Calu-3细胞株来源二、实验材料
大肠杆菌K12的野生型菌株大肠杆菌（Escherichiacoli）K12SF+。

人高转移肺癌细胞095-D  
人肺鳞癌细胞SK-MES-1  
人大细胞肺癌细胞NCI-H661  
人肺黏液上皮样癌细胞NCI-H292  
人肺退行性癌细胞Calu-6  
人肺腺癌细胞NCI-H1395  
人非小细胞肺癌细胞NCI-H358  
人非小细胞肺癌细胞HCC827  
人典型小细胞肺癌细胞NCI-H1688  
人非小细胞肺癌细胞NCI-H1299  
人胚肺二倍体细胞2BS  
人支气管上皮样细胞BEAS-2B  
人胚肺成纤维细胞CCC-HPF-1  
人胚胎气管组织来源细胞CCC-HBE-2  
人肺腺癌细胞Calu-3  
人肺退行性癌细胞Calu-6  
人小细胞肺癌细胞DMS 153  
人高转移肺癌细胞95-D  
人低分化肺腺癌细胞GLC-82  
人肺细胞HLF-a  
人胚肺二倍体细胞HEL-1  
人胚肺二倍体细胞HEL-2  
  
人肺癌细胞H1299  
人非小细胞肺癌细胞HCC827  
人胚肺二倍体细胞KMB-17  
人胚肺细胞系KuMA  
人肺鳞癌细胞LTEP-s  
人小细胞肺癌细胞LTEP-sm  
人肺鳞癌瘤株LTEP-s  
人肺腺癌细胞LTEP-a-2  
人肺腺癌细胞Lu-165  

三、实验器具和药品
1.用具：灭菌培养皿（9厘米），灭菌三角烧瓶（150毫升），灭菌吸管（1.5毫升），灭菌离心管。
2.培养基：
（1）肉汤液体培养基：牛肉膏0.5克，蛋白胨1克，NaCl0.5克，蒸馏水100毫升，pH7.2，高压灭菌15磅/英寸215分钟。
（2）肉汤液体培养基（ZE）：牛肉膏0.5克，蛋白胨1克，NaCl0.5克，蒸馏水50毫升，pH7.2，高压灭菌15磅/英寸215分钟。
（3）基本液体培养基：Vogel50×2毫升，葡萄糖2克，蒸馏水98毫升，pH7.0，高压灭菌8磅/英寸230分钟。