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细胞培养基本成分之血清
点击次数:1100 更新时间:2014-06-04

血清的质量,种类及使用的浓度都有可能影响细胞的生长,而不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆细胞的生长,某些批次血清可能含有毒性或抑制细胞生长的物质。因此,在购买大量血清之前,必须对血清支持细胞生长能力进行检测,然后再大量购买质量好的同一批号的血清,并注意以下几点:

1.需要长期保存的血清必须储存于-20摄氏度~-70摄氏度低温冰箱中。4摄氏度冰箱中保存时间切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加月10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。

2.一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。

3.瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20摄氏度至-70摄氏度低温冰箱中的血清放入4摄氏度冰箱中溶解1天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。再溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20摄氏度进入37摄氏度解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集二出现沉淀。

4.热灭活是指56摄氏度,30分钟加热已*解冻的血清。加热过程中需规则摇晃均匀。此热处理的目的是使血清中的补体成分灭活。除非必须,一般不建议做此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用,平滑肌细胞收缩,肥大细胞和血小板释放组胺,增强吞噬作用,促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。

5.切勿将血清在37摄氏度放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破坏而影响血清质量。

6.血清中的沉淀物絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理。

显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察像“小黑点”,常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。

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