人宫颈癌细胞C-33A细胞培养的一般过程

更新时间：2014-09-29

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人宫颈癌细胞C-33A细胞培养的一般过程
一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备
工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与
消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他
仪器的检查与调试。
二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消
化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取
材这一过程。机体取出的组织细胞的培养称为原代培养。
理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组
织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组
织容易培养。取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大
的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物
质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。
三、培养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直
接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培
养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接
入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生
长状态。

人宫颈癌细胞C-33A细胞培养的一般过程 细胞冻存
配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、离心1000rpm，5min；去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的zui终密度为5×106/ml～1×107/ml；将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/ min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。

人宫颈癌细胞C-33A细胞培养的一般过程 细胞复苏

1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；
3. 离心， 1000rpm，5min；
4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；
5. 次日更换一次培养液，继续培养。

注意事项

1．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但为对数生长期细胞。在冻存前一天换一次培养液；
2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤；
3．冻存和复苏用新配制的培养液。

细胞：

人包皮成纤维细胞HFF
人羊膜细胞WISH
人羊膜细胞HA
人胚胎干细胞E1C4
人羊膜细胞HAN
人宫颈癌细胞HeLa
人卵巢畸胎瘤细胞PA-1
人卵巢腺癌细胞SK-OV-3
人宫颈癌细胞Ca Ski
人子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B
人胎盘绒膜癌细胞BeWo
人宫颈癌细胞C-33A
人胚胎干细胞E1C2
人宫颈癌细胞Hela P10s-11F
人宫颈癌细胞Hela S3
人子宫颈癌细胞（GFP基因修饰）HeLa-GFP
人卵巢癌细胞Caov-3
人宫颈癌细胞H1HeLa
人卵巢癌细胞A2780
人宫颈癌细胞Hela 229
人卵巢癌细胞HO-8910
人子宫鳞癌细胞（高分化）HCC-94
人卵巢透明细胞癌细胞ES-2
人子宫颈鳞状细胞癌细胞SiHa
人胚胎干细胞Endeavour-1
人子宫内膜腺癌细胞HEC-1-A
人胎盘绒毛癌细胞JAR
人卵巢癌细胞COC1
人子宫内膜腺癌细胞RL95-2
人卵巢腺癌细胞OVCAR-3
人胚胎干细胞HES 3.3
人胚胎干细胞SH.hEXl(46.xx)
人胚胎干细胞HES 3.2
人胚胎干细胞HES 3.1
人胚胎干细胞E1C1

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