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人非小细胞肺癌细胞H125细胞
点击次数:1055 更新时间:2014-11-24

人非小细胞肺癌细胞H125细胞

一、放射自显影
1.把干燥的凝胶或印迹紧密贴放在X-射线胶片乳胶层上。Kodak XAR或Fuji RX胶片比较合适。带有14C或35S标记的印迹或样品必须按正确的方向把正面贴在胶片上以保证充分曝光。
2.在室温下置于一个密封蔽光的容器中适当时间。
3.根据制造商推荐的方法操作。
二、PPO荧光显影
PPO-浸润凝胶  
1.电泳后或染色后,把凝胶放入脱色剂(7%冰醋酸,25%甲醇)振荡30分钟。小心倒掉脱色剂、DMSO废液并去掉多余水分。加入5倍凝胶体积的DMSO废液。
2.试问下振荡45分钟,去掉DMSO废液,再加入5倍凝胶体积的新鲜DMSO。
3。室温下振荡45分钟,把DMSO导入DMSO废液贮存器,在DMSO中加入5倍凝胶体积的22%PPO。
4.试问下振荡45分钟,把PPO/DMSO倒回贮液器,作为日常工作,这个溶液可再次使用(一个带有35S的甲硫氨酸的500ml原液可供使用。
5.那PPO浸润的凝胶放在缓缓流动的水中,当PPO扩散出来是,凝胶立即变白。
6.用新鲜的水流轻轻冲洗30分钟到一个小时,取出凝胶并按常法干燥。
7.把凝胶或印迹紧密贴在X射线胶片乳化层上。
8.置于一个-70摄氏度的密封蔽光的容器中适当时间。
9.根据仪器制造商上海通派生物科技有限公司推荐的方法操作。
注意事项
如果凝胶上蛋白质使用的是3H放射标记同位素,胶片应预先曝光以便在放射性衰变与胶片变黑程度间保持一个线性关系。
有一些公司供应商品话的PPO替代物 它们使用方便,但比PPO要贵许多。
用增感屏
1.把一张X-射线胶片放在乌酸钙增感屏上。然后把凝胶或印迹正确贴放在胶片乳胶层上。
2.置于一个-70摄氏度的密封、蔽光的容器里适当时间。
3.按供应商的说明操作。

 

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