人B淋巴细胞瘤细胞Ramos细胞支原体污染的检测

更新时间：2014-12-08

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人B淋巴细胞瘤细胞Ramos细胞支原体污染的检测
相差显微镜观察将细胞接种于事先放置于培养瓶内的支持物(一般用长形盖玻片)，24 小时后用清洁尘镊子从培养瓶中取出支持物，细胞面向上放置于载物片上，再盖上较大盖玻片，用相差油镜观察；若不用支持物培养法，直接取少许培养液滴在载物片上，再盖上盖片观察亦可。支原体在镜下呈暗色微小颗粒，多位于细胞与细胞之间，有时可见类似于布朗运动的表现。应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。

人组织细胞淋巴瘤细胞U937 U-937细胞
人神经胶质细胞瘤细胞U251细胞
人急性单核细胞白血病细胞THP-1细胞
人结直肠癌细胞T84细胞
人肾上腺皮质癌细胞SW-13细胞
小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14细胞
兔主动脉平滑肌细胞SMC细胞
人皮肤黑色素瘤细胞SK-MEL-1细胞
人脑瘤细胞SF767细胞
人脑瘤细胞SF763细胞
人脑瘤细胞SF126细胞
人B淋巴细胞瘤细胞RAMOS（RA.1）细胞
人B淋巴细胞瘤细胞Ramos细胞
人胃腺癌细胞BGC-823 BGC823细胞
小鼠小胶质细胞BV2细胞
非洲绿猴肾细胞CV-1 CV1细胞
人B淋巴细胞瘤细胞Ramos细胞支原体污染的检测 低涨处理地衣红染色观察取已在培养瓶中的支持物盖片或培养液，用新鲜配制的 0.5%枸椽酸溶液处理盖片细胞。用新配制的 Carnoy 液固定两次，每次 10 分钟，取出盖片凉干。用培养液时，先吸取 1mL，500～800r/min 离心 5 分钟后去除上清，留 0.2mL，将 0.5%枸椽酸溶液加入其中，置 10 分钟，加入 Carnoy 液固定，离心弃上清固定液，余 0.2mL 沉淀物，制成 2～3张涂片。然后用 2%醋酸依地红(地衣红 2g，冰醋酸 60mL，加蒸馏水至 100mL)染 5 分钟。纯酒精过三次，每次 1 分钟，封入 Euparal 或树胶中。若染色过深，可先用 75%酒精脱色，再封片。镜下观察见支原体呈暗紫色小点，位于细胞外或细胞之间。

人乳腺癌细胞MDA-MB-435S细胞
小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3细胞
人恶性多发性畸胎瘤细胞NTERA-2细胞
小鼠睾丸畸胎瘤细胞P19细胞
人卵巢畸胎瘤细胞PA-1细胞
小鼠胚胎成纤维细胞PA12细胞
人胰腺癌细胞PANC-1细胞
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC-12 PC12细胞
人成骨肉瘤细胞Saos-2细胞
人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞
人卵巢腺癌细胞SK-OV-3 SKOV3细胞
人骨肉瘤细胞U-2 OS U2OS；U2-OS；U-2OS细胞
小鼠血细胞WEHI-3细胞 WEHI3
小鼠成纤维细胞Φ2细胞
人横纹肌肉瘤细胞A-204细胞
人肺腺癌细胞Calu-3细胞
非洲绿猴肾细胞（SV40转化）COS-7 COS7细胞
人肾癌Wilms细胞G401细胞

人B淋巴细胞瘤细胞Ramos细胞支原体污染的检测 支原体污染的检测荧光染色法观察用荧光染料 Hoechst33258，此染料能与 DNA 特异地结合，可使支原体内的 DNA 着色，然后用荧光显微镜观察。染色方法为：用支持物盖片培养法将细胞接种在盖片上，在细胞汇合前（即未长满前）取出玻片，于碟皿中，用不含酚红的 Hanks 液漂洗，1:3醋酸钾固定 10 分钟，再用生理盐水漂洗后置于 50μg/mL 的 Hoechst33258(生理盐水配制)中染色 10 分钟，置于蒸馏水漂洗 1～2 分钟，向细胞面滴加数滴 pH5.5 磷酸缓冲液，然后置荧光显微镜下观察。若用细胞培养液，先离心去除上清液，再加入 Hanks 液漂洗，离心弃上清后加入1:3 醋酸甲醇固定 10 分钟，再用生理盐水漂洗后去上清液，再用 Hoechst33258 染色 10 分钟，加入蒸馏水漂洗，离心去上清蒸馏水，加 3～5 滴 pH5.5 磷酸缓冲液，稍吹打使沉淀细胞重悬浮，用吸管吸出，滴于载物片上，盖上盖片后观察。荧光显微镜下支原体呈绿色小点，散在于细胞周围或附于细胞表面。

人肝癌细胞Hep G2 HepG2细胞
人包皮成纤维细胞HFF细胞
人早幼粒急性白血病细胞HL-60细胞
人骨肉瘤细胞HOS细胞
人慢性髓系白血病细胞K562细胞
人前列腺癌细胞LNCaP细胞
人乳腺癌细胞MCF 7B细胞
小鼠红白血病细胞MEL细胞
人急性淋巴母细胞性白血病细胞MOLT-4细胞
人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞
人小细胞肺癌细胞NCI-H209细胞
人Burkitt淋巴瘤细胞Raji细胞
小鼠垂体瘤细胞AtT-20 AtT20细胞
非洲绿猴肾细胞VERO细胞

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