人B淋巴细胞瘤细胞Ramos细胞 支原体污染的检测 相差显微镜观察 将细胞接种于事先放置于培养瓶内的支持物(一般用长形盖玻片),24 小时后用清洁尘镊子从培养瓶中取出支持物,细胞面向上放置于载物片上,再盖上较大盖玻片,用相差油镜观察;若不用支持物培养法,直接取少许培养液滴在载物片上,再盖上盖片观察亦可。支原体在镜下呈暗色微小颗粒,多位于细胞与细胞之间,有时可见类似于布朗运动的表现。应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。 人组织细胞淋巴瘤细胞U937 U-937细胞 人神经胶质细胞瘤细胞U251细胞 人急性单核细胞白血病细胞THP-1细胞 人结直肠癌细胞T84细胞 人肾上腺皮质癌细胞SW-13细胞 小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14细胞 兔主动脉平滑肌细胞SMC细胞 人皮肤黑色素瘤细胞SK-MEL-1细胞 人脑瘤细胞SF767细胞 人脑瘤细胞SF763细胞 人脑瘤细胞SF126细胞 人B淋巴细胞瘤细胞RAMOS(RA.1)细胞 人B淋巴细胞瘤细胞Ramos细胞 人胃腺癌细胞BGC-823 BGC823细胞 小鼠小胶质细胞BV2细胞 非洲绿猴肾细胞CV-1 CV1细胞 人B淋巴细胞瘤细胞Ramos细胞 支原体污染的检测 低涨处理地衣红染色观察 取已在培养瓶中的支持物盖片或培养液,用新鲜配制的 0.5%枸椽酸溶液处理盖片细胞。用新配制的 Carnoy 液固定两次,每次 10 分钟,取出盖片凉干。用培养液时,先吸取 1mL,500~800r/min 离心 5 分钟后去除上清,留 0.2mL,将 0.5%枸椽酸溶液加入其中,置 10 分钟,加入 Carnoy 液固定,离心弃上清固定液,余 0.2mL 沉淀物,制成 2~3张涂片。然后用 2%醋酸依地红(地衣红 2g,冰醋酸 60mL,加蒸馏水至 100mL)染 5 分钟。纯酒精过三次,每次 1 分钟,封入 Euparal 或树胶中。若染色过深,可先用 75%酒精脱色,再封片。镜下观察见支原体呈暗紫色小点,位于细胞外或细胞之间。 人乳腺癌细胞MDA-MB-435S细胞 小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3细胞 人恶性多发性畸胎瘤细胞NTERA-2细胞 小鼠睾丸畸胎瘤细胞P19细胞 人卵巢畸胎瘤细胞PA-1细胞 小鼠胚胎成纤维细胞PA12细胞 人胰腺癌细胞PANC-1细胞 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC-12 PC12细胞 人成骨肉瘤细胞Saos-2细胞 人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞 人卵巢腺癌细胞SK-OV-3 SKOV3细胞 人骨肉瘤细胞U-2 OS U2OS;U2-OS;U-2OS细胞 小鼠血细胞WEHI-3细胞 WEHI3 小鼠成纤维细胞Φ2细胞 人横纹肌肉瘤细胞A-204细胞 人肺腺癌细胞Calu-3细胞 非洲绿猴肾细胞(SV40转化)COS-7 COS7细胞 人肾癌Wilms细胞G401细胞 人B淋巴细胞瘤细胞Ramos细胞 支原体污染的检测 支原体污染的检测 荧光染色法观察 用荧光染料 Hoechst33258,此染料能与 DNA 特异地结合,可使支原体内的 DNA 着色,然后用荧光显微镜观察。染色方法为:用支持物盖片培养法将细胞接种在盖片上,在细胞汇合前(即未长满前)取出玻片,于碟皿中,用不含酚红的 Hanks 液漂洗,1:3醋酸钾固定 10 分钟,再用生理盐水漂洗后置于 50μg/mL 的 Hoechst33258(生理盐水配制)中染色 10 分钟,置于蒸馏水漂洗 1~2 分钟,向细胞面滴加数滴 pH5.5 磷酸缓冲液,然后置荧光显微镜下观察。若用细胞培养液,先离心去除上清液,再加入 Hanks 液漂洗,离心弃上清后加入1:3 醋酸甲醇固定 10 分钟,再用生理盐水漂洗后去上清液,再用 Hoechst33258 染色 10 分钟,加入蒸馏水漂洗,离心去上清蒸馏水,加 3~5 滴 pH5.5 磷酸缓冲液,稍吹打使沉淀细胞重悬浮,用吸管吸出,滴于载物片上,盖上盖片后观察。荧光显微镜下支原体呈绿色小点,散在于细胞周围或附于细胞表面。 人肝癌细胞Hep G2 HepG2细胞 人包皮成纤维细胞HFF细胞 人早幼粒急性白血病细胞HL-60细胞 人骨肉瘤细胞HOS细胞 人慢性髓系白血病细胞K562细胞 人前列腺癌细胞LNCaP细胞 人乳腺癌细胞MCF 7B细胞 小鼠红白血病细胞MEL细胞 人急性淋巴母细胞性白血病细胞MOLT-4细胞 人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞 人小细胞肺癌细胞NCI-H209细胞 人Burkitt淋巴瘤细胞Raji细胞 小鼠垂体瘤细胞AtT-20 AtT20细胞 非洲绿猴肾细胞VERO细胞 |