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复苏: 1、准备一个茶缸或1000ml的烧坏,内装2/3杯37℃的温水。 2、从液氮中取出冻存管、迅速置于温水中并不断搅动。使冻存管中的冻存物在1分钟之内融化。 3、打开冻存管,将细胞悬液吸到离心管中。 4、1000rpm离心10分钟,弃去上清液。 5、沉淀加10ml培养液,吹打均匀,再离心10分钟,弃上清液。 6、加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中,37℃培养,第二天观察生长情况。 试剂和器材: 器材:液氮罐、冻存管(塑料螺口冻存管或安瓿瓶)、离心管、吸管、离心机等 试剂:0.25%胰酶、培养基、含保护剂的培养基(即冻存液) 附:冻存液配制: 培养基加入甘油或DSMO,使其终浓度达5—20%。保护剂的种类和用量视不同细胞而不同。配好后4℃下保存。 巨噬细胞原代培养 1.实验前三天,向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml(勿注入肠内)。 2.引颈杀死动物,手提鼠尾将全鼠浸入70%酒精中3~5秒。 3.置动物于解剖台上,用针头固定四肢,双手持镊撕开皮肤拉向两侧,暴露出腹膜,但勿伤及腹膜壁。 4.再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中,同时从两侧用手指揉压腹膜壁,令液体在腹腔内充分流动。 5.用针头轻轻挑起腹壁,使动物体微倾向一侧,使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。 6.小心拔出针头,把液体注入离心管中,250g 4℃离心10分钟,去上清,加10 ml Eagle培养基。 7.计数细胞,每只小鼠可产生20~30×105细胞,其中90%为巨噬细胞。 8.为获取3×105个帖附细胞/平方厘米,需接种2.5×106/ml。 9.为纯化培养细胞,去除其它白细胞,接种数小时后,去除培养液,用Eagle液冲洗1~2次后,再加新Eagle培养液置37℃ CO2温箱中培养。 人低分化肺腺癌细胞 GLC-82细胞 货号: 430168 密封培养瓶 直角斜颈 TC表面 人小细胞肺癌细胞 NCI-H446细胞 货号:430639 培养瓶 25cm2 直角斜颈(正方斜口) 透气盖 PS 人胚肺二倍体细胞 KMB-17细胞 货号:4489 灭菌 独立包装 25ml移液管 人胚肺二倍体细胞 2BS细胞 货号:4490 灭菌 独立包装 50ml移液管 人胚胎肺成纤维细胞 WI-38细胞 货号:430166 培养皿60X15MM TC表面 PS(聚苯乙烯) 人胚胎气管组织来源细胞 CCC-HBE-2细胞 货号:431079 培养瓶 175cm2 直角角度颈 密封盖 PS(聚苯乙烯) 人胚肺成纤维细胞 CCC-HPF-1细胞 货号:431080 直角角度颈 透气盖 PS(聚苯乙烯)材质 MRC-5细胞--MRC-5细胞 细胞株 货号:3524 带盖 灭菌 单独包装 24孔标准透明板 人胚肺成纤维细胞 MRC-5细胞 细胞株 货号:430165 培养皿 35X10MM TC表面 PS(聚苯乙烯) 人小细胞肺癌细胞 NCI-H209细胞 货号:430167 培养皿100X20MM TC表面 PS(聚苯乙烯)材质 人肺腺癌细胞 Calu-3细胞 货号:3516 6孔细胞标准培养板 TC表面 单独或单个成套包装 人胚肺转化细胞 SL-1细胞 货号:3513 12 孔透明标准板 TC表面 灭菌 人支气管上皮样细胞 BEAS-2B细胞 货号:3548 48孔板 TC表面 灭菌 单个包装 人胚肺二倍体细胞 HEL-2细胞 货号:430599 培养皿 150X25MM TC表面 PS(聚苯乙烯)材质 人肺鳞癌细胞 NCI-H226细胞 货号:430488冻存管 2.0ml 圆底 自立式 内旋密盖 PP(聚丙烯)材质 灭菌 大包装 硅胶垫圈 人肺转化细胞系 AE1201细胞 货号: 430659 冻存管 2.0ml 圆底 自立式 外旋密盖 PP(聚丙烯)材质 灭菌 人胚肺细胞系 KuMA细胞 货号: 4485 移液管 灭菌 独立包装 人胚肺二倍体细胞 HEL-1细胞 货号: 4486 移液管 灭菌 独立包装 PPW 人小细胞肺癌细胞 DMS 153细胞 货号:4487 5ml移液管 灭菌 独立包装 人肺细胞 HLF-a细胞 货号:4488 灭菌 独立包装 10ml移液管 |