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传代细胞
点击次数:1359 更新时间:2015-07-07
 

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定期移植法  ATCC细胞,传代细胞
subculturing  亦称传代培养保藏法,指将菌种接种于适宜的斜面培养基上,zui适条件下培养,待得到健壮的菌体后,于4~6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的一种短期菌种保藏方法。

蒸馏水法 
preservation in distilled water  指将欲保藏的菌种细胞悬浮于无菌蒸馏水中,密封后置于4~6℃保存的一种菌种保藏方法。

液体石蜡法 
preservation in liquid paraffin 亦称矿物油保藏法,定期移植保藏法的辅助方法。指将菌种接种在适宜的斜面培养基上,zui适条件下培养至待得到健壮的菌体后注入灭菌的液体石蜡,使其覆盖整个斜面,再直立放置于低温(4~6℃)干燥处进行保存的一种菌种保藏方法。

强化梭菌琼脂培养基】:牛肉膏  10g,蛋白胨 5g,酵母粉 3g,D(+)-葡萄糖5g,淀粉 1g,NaCl 5g ,NaAc 3g,L-半胱氨酸盐酸盐 0.5g,蒸馏水 1.0L,琼脂 15g,121℃湿热灭菌15min。如需要可添加多粘菌素B(0.02g/L).pH6.8±0.2(25℃)

【MRS培养基】:酪蛋白胨  10.0克,牛肉浸取物 10.0克, 酵母提取液 5.0克 ,吐温80    1.0克 ,磷酸氢二钾  2.0克,七水硫酸镁 0.2克  ,气水硫酸锰  0.05克  , 碳酸钙 20.0克 ,琼脂  20.0克 ,蒸馏水 1.0升, PH6.8  葡萄糖20.0克  ,  乙酸钠 5.0克 ,柠檬酸二钠 2.0克
【麦芽汁琼脂】:将发酵啤酒的原料(未加酒花),稀释至10柏林,加琼脂20克/L,溶化后分装。15磅 , 灭菌30分钟。
【酵母膏琼脂】:Glucose (葡萄糖) 10g Yeast extract (酵母膏) 10g Water (水) 1000ml Agar (琼脂) 15g pH 7.2
【综合马铃薯培养基】:20%Potato extract (马铃薯汁) 1L ,Glucose (葡萄糖) 20g,KH2PO4 3g,MgSO4·7H2O 1.5g,Vitanib B1 (硫胺素) Trace 8mg  , Agar (琼脂) 20g   pH 6,20%马铃薯配配制:取去皮马铃薯200克,切成小块,加水1000毫升煮沸20分钟,滤去马铃薯块,将滤液补足1000毫升。

-80℃冰箱冻结法 preservation at -80℃
指将菌种悬浮于保护剂中,在-80℃冰箱中冻结保存的一种长期菌种保藏方法。

液氮超低温冻结法 
preservation in liquid nitrogen  指悬浮于保护剂中的菌种经程控降温后,移置于-196℃的液氮或-150℃左右的液氮气相中保存的一种长期菌种保藏方法。

真空冷冻干燥法
freeze-drying 指将欲保藏的菌种细胞或孢子悬浮于保护剂中,经预冻后在真空条件下使水分升华,再经真空封存后保存的一种长期菌种保存方法

【麦麸琼脂】: Wheat bran (麦麸) 3.6% (NH4)2HPO4 0.3% K2HPO4 0.02% MgSO4.7H2O 0.01% Agar (琼脂) 2% pH 7.0
【豌豆琼脂】:Glucose (葡萄糖) 1% Peptone (蛋白胨) 0.5% NaCl 0.5% Agar (琼脂) 2.0% Pea infusion (counted by NH2) [豌豆浸汁(以NH2计)] 12-14 mg∕100 pH (before sterilization) [消前] 7.2-7.5 [Note]: Preparetion of pea infusion (豌豆浸汁的制法)
【氧化硫硫杆菌培养基】:(NH4)2SO4 0.3g KH2PO4 3-4g CaCl2 (anhydrous) [无水] 0.25g MgSO4.7H2O 0.5g FeSO4.7H2O 0.001g Distilled water (蒸馏水) 1000ml pH 3.5-4
【苹果酸钙琼脂】:Calium malate (苹果酸钙) 10g K2HPO4 0.5g NH4Cl 0.5g Glycerol (甘油) 10g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml
【燕麦粉琼脂】:Oatemeal(infusion)[燕麦粉浸液] 20g Agar (琼脂) 18% Trace element solution (迹量盐溶液)1ml Distilled water up to (用蒸馏水补充至1000毫升) 1000ml pH 7.2 [Note]:Trace element solution (迹量盐溶液): FeSO4.7H2O 0.1g MnCl2.4H2O 0.1g ZnSO4.7H2O 0.1g Distilled water (蒸馏水) 100ml

 
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