肿瘤细胞的取材和培养 

(一)肿瘤细胞的取材方法:培养肿瘤细胞的材料一般来自患者，对实体瘤患者可取原发肿瘤组织或转移灶，有胸、腹水患者可取胸水或腹水，白血病患者可取血液或骨髓液进行培养。

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实体瘤取材方法:取术后或活检标本，要尽早浸入无血清培养液保鲜，尽快进行培养。尽可能去除溃疡及坏死组织，避免细菌、霉菌污染，对取自外露的肿瘤组织，应在培养前在含二性霉素B 2μg/mL，青霉素200～1000u/mL，链霉素500μg/mL的培养液中浸泡10～20分钟，再用洗液反复冲洗干净后，再作培养。  

体腔液的取材方法:在无菌条件下采取体腔液(胸水或腹水)，不需加抗凝剂，可直接以1200r/min收集细胞，不要久置，也不要在冰中冷却，而应尽早接种。  

血液(骨髓)取材法:白血病患者可取血液或骨髓，主要以取外周血为研究对象，用肝素抗凝的注射器无菌抽取5～10mL外周血，置于试管中立刻分离培养。

肿瘤细胞的培养方法:肿瘤细胞对培养基要求不如正常细胞严格，一般常用RPM1640，DMEM、Mc-Coy-等培养基，血清浓度不高，10%即可，建议在原代培养时能加入生长因子或原患者血清(1%～2%)以利细胞生长，培养方法很多，主要有组织块法、酶消化法、钽网法、脱落细胞法等。

小鼠胚胎肝细胞，BNL CL.2细胞
小鼠肝癌细胞，H22细胞
小鼠肾集合管细胞（含 SV40病毒序列），M-1细胞
小鼠肾足细胞（含 tsSV40T序列），Mouse podocyte细胞
小鼠肾上腺皮质细胞，Y1细胞
小鼠前列腺癌细胞，RM-1细胞
小鼠树突状细胞肉瘤细胞，DCS细胞
小鼠小脑组织细胞，C8-D1A细胞
小鼠垂体瘤细胞，GT1-1细胞
小鼠小胶质细胞，BV2细胞
小鼠脑瘤细胞，BC3H1细胞
小鼠神经母细胞瘤细胞，Neuro-2a细胞
小鼠树突状细胞肉瘤瘤株，DCS细胞

原代细胞的培养方法如下：
组织块培养法:将取得的瘤组织去除脂肪\结缔组织及坏死部分，在平皿中用Hanks液洗3次，剪碎组织，切成1~2mm3小块，接种于事先涂有鼠尾胶原的培养瓶（或皿）中，37℃ 5%或加盖瓶塞在普通恒温箱中培养。 

酶消化法:在上述的碎组织块中加入0.25%胰蛋白酶或(2000u/ml胶原酶)在37℃水浴中消化30分钟(或更长一些)，去除消化液，用洗液洗3次，培养液洗1次后，用*培养基悬浮，并用吸管吹打分散制成细胞悬液，计数。以5×108 ～10×108 /L细胞浓度，在含有10%小牛血清的RPMI1640(或Eagle MEM或DMEM)中37℃ 5% CO2下分瓶(或皿)培养。

小鼠肺成纤维细胞，WML2细胞
小鼠肺腺癌瘤株，LA795细胞
小鼠肺癌细胞，LLC细胞
小鼠肺成纤维细胞，MML细胞
小鼠肝癌细胞，Hepa 1-6细胞
小鼠胃癌细胞，MFC细胞
小鼠前胃癌细胞，MFC细胞
小鼠前胃癌细胞（绿色荧光蛋白标记），MFC-GFP细胞
小鼠肝上皮细胞，BNL 1ME A.7R.1细胞
小鼠结肠癌细胞，CT26.WT细胞
小鼠正常肝细胞，NCTC 1469细胞

钽网培养法:在一张面积约为1cm2 的钽网上放入上述剪碎的一块或几块肿瘤组织块(1~2mm3 大小)，用镊子轻压，使其粘于网上，再把钽网放入培养皿中，使网下的组织块与皿壁紧紧接触，于37℃ 5% CO2下培养，每隔2~3天换液一次，5天后可见有上皮细胞从网上移出，并能在相当于肿瘤组织部位形成纯净的单层上皮细胞。  

脱落细胞法:将新鲜的肿瘤组织去除脂肪和结缔组织，洗液洗2次后，用刀片将肿瘤组织切成细薄片，在切割的同时有许多上皮细胞脱落下来，脱落细胞经洗涤后，加入*培养基，便可获得较纯的上层细胞，于培养瓶(或皿)中、37℃ 5% CO2下培养，每隔2～3天换液，7～10天上皮细胞逐渐长成单层。

在原代培养中，常在培养物中混有正常成纤维细胞，若把正常细胞误认为是癌细胞，就会使整个工作失去意义，若不及时去除这些成纤维细胞，由于它比肿瘤细胞生长快，zui终能抑制肿瘤细胞的生长。因此，尽早排除成纤维细胞，已成为肿瘤细胞长期培养建系的关键，现已发现有许多因素能抑制成纤维细胞生长