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以普通大鼠肾脏细胞为研究对象,发现这些细胞在迁移的过程中会不断地向胞外释放内容物,这种新发现的细胞事件被称为迁移胞吐作用(migracytosis)。 (鸡DT40细胞 来源:通派细胞库 鸡淋巴瘤细胞)(人A549细胞 来源:通派细胞库 人肺腺癌细胞 ) 细胞在迁移的过程中会将其收缩纤维留在胞体后侧。在收缩纤维的横截面处会有很多直径约为3um的囊泡,即为新发现的"迁移小体"。(小鼠Raw264.7细胞 来源:通派细胞库 小鼠单核巨噬细胞) 这些迁移小体中还包括有很多直径约50-100nm的小泡。zui终收缩纤维会发生断裂,从而这些迁移小体会释放到胞外并被周围的细胞吞噬。(RGC-5细胞 来源:通派细胞库 RGC-5细胞信息) 通过密度梯度离心的方法得到了细胞裂解物的不同组分,比较发现migrasome富集在某一特定的组分中。 (鼠661W细胞 来源:通派细胞库 鼠视网膜神经节细胞) 通过质谱的手段筛选了一系列migrasome特异性的蛋白,在大量膜蛋白与细胞骨架相关蛋白的候选物中,发现Tetraspanin-4(TSPAN4)是其中migrasome定位zui准确的蛋白质,人工构建了(TSPAN4)-荧光报告基因供后续研究。 (人DLD-1细胞 来源:通派细胞库 人结直肠腺癌细胞)(人Siha细胞 来源:通派细胞库 人宫颈细胞) 当细胞密度很大时,TSPAN4在细胞内的分布十分弥散,只有在细胞膜上有少量富集;但是当细胞密度较低时,随着细胞收缩纤维的伸长,很多TSPAN4富集于收缩纤维区域,特别是其表面的环状结构。 (小鼠NIH 3T3细胞 来源:通派细胞库 小鼠成纤维细胞)(人Huvec细胞 来源:通派细胞库 人脐静脉内皮细胞) 通过比较共聚焦显微镜成像结果与电镜投射结果,证实了这部分"环状"的结构即之前发现的migrasome。 (人CNE-2细胞 来源:通派细胞库 人鼻咽癌细胞 ) 通过一系列药物处理,发现migrasome的形成依赖于细胞的迁移过程,而且依赖于细胞骨架蛋白actin的多聚化。体外过表达的实验与对动物组织的检测分别证明migrasome在各类细胞系以及原代细胞中是广泛存在的。 |