H22细胞 小鼠肝癌细胞 为您提供复苏，冻存等细胞，也可根据客户要求定做耐药细胞株，细胞染色等技术服务。 具体细胞信息（说明书，鉴定书），售后情况，细胞活动请 ：tongpaibio 索取资料。 因细胞种类较多，信息量较大，故无法发布在这里，您可以通过以下方式索取细胞资料：
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复苏细胞下单后的1-2周内到货，冻存细胞2天内到货 试剂盒适用于检测猪脑、扁桃体、肾和脾及血清、淋巴结等标本和病毒培养液中猪疱疹病毒(PHV)DNA，适用于猪疱疹病毒(PHV)感染的辅助诊断及流行病学调查。其检测结果仅供参考。
本试剂盒用一对猪疱疹病毒1型(PHV)特异性引物和一条特异性荧光探针，经过裂解提取DNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体(dNTPs)等成分，通过PCR-荧光探针法对猪疱疹病毒(PHV)DNA进行扩增，从而达到快速定量检测之目的。
标本采集、保存和运输
适用标本类型：发病猪脑（以中脑和脑桥病毒含量zui高）、扁桃体、肾和脾等组织；病毒细胞培养液
标本采集： 适用标本类型：猪脑、扁桃体、肾和脾及血清、淋巴结等标本和病毒培养液
标本采集：
发病猪脑、淋巴结、扁桃体、肾和脾等组织标本：无菌条件下取上述组织1g左右，置入1.5ml洁净EP管，立即送检。
血清：用一次性无菌注射器抽取受检猪耳静脉或者前腔静脉静脉血2-5ml，静置斜放待血清析出， 1,0000rpm离心3分钟，可取上清立即用于测试；或吸取上部血清(约200μl)转入无菌1.5ml Eppendoff管，保存待检。
3. 保存和运输：上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过6个月，标本运送应采用0℃ DNA提取
血清或病毒液：取液体标本约50μl，转至1.5ml洁净离心管中，加50μl核酸提取液B(内含不溶物质，使用前需室温溶解并充分混匀)，充分混匀后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液3μl进行PCR扩增。
发病猪脑、淋巴结、扁桃体、肾和脾等组织标本：取适量200mg固体组织，用生理盐水洗净表面残余血液，转至研磨器中，加1ml生理盐水，研磨成组织匀浆，取50μl组织匀浆转至1.5ml洁净的离心管中，加50μl核酸提取液B(内含不溶物质，使用前需室温溶解并充分混匀)，充分混匀，100℃裂解10min，4℃13,000g离心3min，取上清液3μl进行PCR扩增。
阴性质控品：取50μl阴性质控品，加50μl核酸提取液B(内含不溶物质，使用前需室温溶解并充分混匀)，充分混匀后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液3μl进行PCR扩增。
PHV阳性质控品：直接取4l进行PCR扩增，或者按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。
2. PCR扩增
从试剂盒中取出PHV PCR MIX、Taq酶系，室温融化并振荡混匀后，10,000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N（N=样本数+1管阴性对照+4管阳性对照），每个测试反应体系配制如下表：
试剂 PHV PCR MIX Taq酶系
用量 24μl 2μl
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10,000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入26μl，向每管中加入处理后样品或PHV阳性定量标准品(使用前用阴性质控品梯度稀释阳性质控品10倍、100倍、1000倍，记为1×10P6PCopies/ml，1×10P5PCopies/ml，1×10P4PCopies/ml)和阴性质控品4μl，10,000rpm瞬时离心30秒。将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内，按对应顺序设置阴性控品，阳性定量标准品以及未知标本，并设置反应体积(30μl)、样品名称、标记荧光基团种类(报告基团为FAM，淬灭基团为TAMRA)和循环条件：
ABI PRISM 7700，ABI PRISM5700，ABI GeneAmp 7000 (需要剪掉反应盖)，ABI PRISM7300/7500(使用8联管)，MJ Opticon(使用8联管)等使用薄壁管的仪器:循环条件：94℃→2分钟，93℃ 30秒→55℃ 45秒，40个循环。
LightCycler等使用毛细管的仪器: 循环条件：94℃→2分钟，后93℃ 5秒→58℃ 45秒，共40个循环。
3. 结果分析判定
反应结束后保存检测数据文件。根据分析后图像调节baseline的start值（3~8），stop值（13~18）以及Threshold值，使Std curve 窗口下的标准曲线达到*（correlation数值介于-0.97~-1之间，correlation数值等同于∣r∣值），zui后到Reporter窗口下记录仪器自动分析计算出的未知标本数值（Qty-Copies/ml）。
【质控标准】
阴性质控品：全部阴性。
PHV-阳性质控品：阳性质控品的 Ct 值均应小于 35.0。
∣r∣≥0.97（correlation数值介于-0.97~-1之间，correlation数值等同于∣r∣值）。
以上条件应同时满足 ，否则，此次试验视为无效，全部试验应重新进行。
【结果判定】
测定结果的计算：
如果Ct值﹤38，则实验样品的PHV DNA含量(基因拷贝数/ml)= Qty-Copies/ml；
如果38﹤Ct值﹤40，为灰区建议重新检测，重新检测若38﹤Ct值﹤40判为阳性，否则为阴性。
如果Ct值=40，则PHV DNA含量（基因拷贝数/ml）﹤1×10P2PCopies/ml (低于检测下限)。
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